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树突状细胞(DC)的培养及CEA-重组痘苗病毒转染DC诱导的特异性T细胞免疫

【摘要】: 体外成功地完成了CD14+单核细胞来源的树突状细胞(DC)的培养,并进一步研究人癌胚抗原重组痘苗病毒(rV-CEA)转染DC后体外诱导的CEA特异性细胞免疫。首先,分离癌症患者的外周血单核细胞,分别加入:重组人粒-单集落刺激因子(rhGM-CSF)1000U/ml+IL-4 500U/ml(A组)、rhGM-CSF1000U/ml(B组)及单纯含10%牛血清的RPMI1640(C组)。体外培养一周后,于光镜及电镜下观察细胞的形态、流式细胞仪检测细胞的表面标志、MTT比色法检测上述三种条件培养的细胞对T细胞的刺激增殖作用。结果,癌症患者外周血中的单核细胞在rhGM-CSF 1000U/ml+IL-4500U/ml的条件下培养一周,就可看到典型的树突状细胞形态,其表面CD14分子表达减少,HLA-DR、CD54、CD40、CD83及CD86分子的表达明显增高,且具有明显刺激T细胞增殖的能力,成功地完成了外周血单核细胞来源的DC的培养。其次,用rV-CEA转染晚期大肠癌患者的DC,再激发自体T细胞,然后检测T细胞对CEA分泌性肿瘤细胞的体外杀伤活性,并与未经rV-CEA转染的DC激发的T细胞及野生型痘苗病毒转染的DC激发的T细胞进行对比。结果,经rV-CEA转染的DC激活的T细胞增殖力强,且对CEA分泌性肿瘤细胞具特异性杀伤活性。

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