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急性髓细胞白血病细胞来源的树突状细胞的诱导及功能研究

【摘要】: 目的 将急性髓细胞白血病(AML)细胞诱导成为树突状细胞(DCs)并进行其功能研究。方法使用淋巴细胞分离液,分离25例AML患者骨髓或外周血单个核细胞,在含有细胞因子rhGM-CSF,rhIL-4,rhTNF-α的IMDM完全培养基中培养8-12天。在倒置显微镜下观察细胞的生长情况,经离心涂片机制备细胞涂片,姬式染色后观察细胞形态。应用流式细胞术测定诱导前后细胞表型,应用荧光原位杂交(FISH)进行细胞遗传学分析,通过同种异体混合淋巴细胞反应(Allo-MLR)—~3H-TdR掺入法,检测其刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。结果25例中有20例自诱导培养的第3天起,在倒置显微镜下可观察到部分细胞体积增大,形态由圆形变得不规则,呈多形性,可见驼峰样或细刺状胞浆突起。随着培养时间的延长,绝大多数细胞总数较起始减少,但具有上述形态的细胞数量逐渐增加;在诱导培养的第8-9天,该类细胞所占的比例达到峰值;诱导培养至第12天,细胞总数及上述形态的细胞数量明显减少。诱导培养结束时(8-12天)收集细胞,检测了18/20例诱导后细胞表面标志(CD1a,CD54,CD80,CD83,CD86,HLA-DR)的表达。比较了其中11例诱导前后细胞各表面标志表达的情况,结果表明,诱导前CD1a,CD80,CD83的表达阴性,5.4%细胞表达HLA-DR,5.2%细胞表达CD54,2.5%细胞表达CD86;诱导后CD1a,CD80,CD83,HLA-DR,CD54,CD86的表达率分别为3.2%,18.7%,3.8%,10.3%,53.2%,39.7%。经统计学分析,HLA-DR表达无显著差异(P>0.05),其他表面标志的表达差异均有显著意义(P<0.01);而且,各表面标志的表达与细胞在Allo-MLR中刺激T细胞增殖的能力有关,CD1a具有负相关性,HLA-DR,CD80,CD86,CD83及CD54均系正相关。应用FISH分别对2例M_3患者诱导前后的细胞进行核型分析,显示一致的t(15;17)杂交信号,证实了诱导生成的树突状细胞的白血病起源。在Allo-MLR中,该类细胞刺激同种异体淋巴细胞增殖—对~3H-TdR的摄取能力明显高于AML原始细胞。结论联合应用细胞因子rhGM-CSF,rhIL-4,rhTNF-α,体外可将急性髓细胞白血病细胞 诱导成具有树突状细胞形态、表型及功能特征的细胞(AML一DCS)。

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