bck

收藏本站

小麦盐胁迫应答基因的分离克隆及转基因烟草表达模式研究

【摘要】:土壤盐渍化是十分严重的农业问题。多数农作物的耐盐能力相对较低,因而培育耐盐能力相对提高的作物品种已成为植物分子育种工程的目标之一。分离与鉴定植物耐盐基因对耐盐育种起着十分重要的作用。植物的耐盐性是一个受多基因调控的数量遗传性状。近年来,人们更加重视结构基因产物(如运输蛋白、离子通道、溶质合成相关酶等)以及这些产物所起的调控作用。 植物基因组非常庞大,在遗传背景不很清楚的情况下,要从其中找出需要的目的基因实非易事。然而,随着近年来生物化学、酶学、分子生物学等学科的迅速进展,为目的基因的分离提供了有效手段。mRNA差别显示反转录PCR(mRNA differential display reverse transcription polymerase chain reaction)技术,简称DDRT-PCR,尤为引人注目。mRNA差别显示技术的建立为研究耐盐基因在不同组织、不同器官、不同环境条件以及不同发育时期的差异表达提供了可能,为植物耐盐分子机理研究提供了很多有价值的实验结果。目前这一研究技术也已广泛应用于抗性基因如抗旱、耐低温和抗病特性的分子机理研究中。 本研究以宝丰7228~r小麦幼苗叶片为材料,利用DDRT-PCR技术对正常条件下与盐胁迫条件下小麦叶片基因表达的差异进行分析,以期找到有价值的耐盐相关基因。从1.0%NaCl处理72h的小麦幼苗叶片提取纯化mRNA,经过锚定引物Oligo(dT)12GC反转录得到cDNA第一链,用10个碱基随机引物进行二次PCR扩增,经2.0%琼脂糖凝胶电泳检测到27条差异cDNA片段,包括12条诱导表达片段,4条增强片段和11条抑制表达片段。对11条差异较明显的cDNA片段 西北大学学位论文 进行了克隆。Northem印迹分析结果显示sR0)、sR03、SR口7片段存在明显的胁 迫诱导表达特征,即盐胁迫条件下有杂交信号,而无盐胁迫时没有杂交信号。对 SROI、SR03、SR07三个克隆进行了序列测定和同源性对比分析。 GenBa创k/BLAST检索发现,SRO!与己知基因或蛋白没有明显的同源性,推 测为未知蛋白;SR口了与单粒麦属肌动蛋白的核昔酸序列一致性达到33%。肌动 蛋白(act in)是真核生物细胞中普遍存在的一种重要蛋白质,构成细胞骨架中的 微丝系统,肌动蛋白与肌球蛋白在植物细胞运动中担负重要作用。推测.外刃J对 应基因的编码产物通过参与胞质运动使小麦细胞对盐胁迫做出防御性应答扣分刃7 片段与植物水孔蛋白中质膜内在蛋白(PIPs)有87%的序列同源性。推测其对应 基因的编码产物是一种水孔蛋白或水孔蛋白同源物,其表达是小麦适应盐胁迫的 一种积极反应。 进一步对5斤口7片段的生物学信息分析表明,该基因片段含有一个561bp的 开放阅读框,编码156个氨基酸残基,起始密码子和终止密码子分别位于55和 613位核昔酸,5’端有54个非编码序列,3’端有165个非编码序列,由5万口7 编码的蛋白质(SR07)的分子量大小约19639.65,等电点为7.745。跨膜分析表 明该蛋白含有2个跨膜区分别位于10一15,25一35位氨基酸残基。此外,还预测 了该编码蛋白磷酸化位点并进行了亲水性分析。 为了研究SR口7在植物耐盐性上的作用,根据3’和5’末端片段的序列信 息设计SRo7的开放阅读框两侧的基因专一性引物SPI和SPZ,从而得到约56obP 的产物,该产物经测序证实为SR07的完整编码序列。将SR07克隆到植物转化 载体pCAMBIA中caMV35S启动子下游,构建表达载体pCAMBIA一sR07,利 用根癌农杆菌(Agrobacterl’um tumefacien:)质粒介导的遗传转化系统转化烟草 (Nicotiana tabacum),经筛选后获得3个烟草转化系,分别命名为转化系I、 转化系n和转化系m。转基因植株中SR07基因的PCR和Southern杂交结果表 明该基因导入了烟草的基因组。 将3个转化系烟草分别用1.0%的NaCI处理24h后,Northem分析结果显 示,在不同样品之间RNA量基本一致的条件下,非转基因烟草没有杂交带出现, 而在三个转化系的植株中均出现一条杂交信号强弱不同的特异的杂交带,说明 SR口7基因能够正确转录,而转录水平在不同个体之间存在差异,这种差异可能 由基因沉默或因植株个体之间在生理活性方面的差异引起。 我们以烟草转化系H作为研究对象,用不同浓度的NaCI处理24h后,进行 Northem分析。结果显示,SR07在烟草中的表达明显受到盐的诱导,和未处理 相比,表达量明显增强。但是,当盐浓度过高时,表达量反到下降,这可能是由 摘要 于盐浓度过高,烟草的生长受到抑制或处于停止生长状态,以至于sR口7表达下 降或停止。 以烟草转化系11作为研究对象,用1.0%的NaCI分别处理oh,6h,12h,24h, 48h后,进行Northem分析。结果显示,在1 .0%的NaCI处理6h内,SR口7的表 达就明显增高,至48h的表达未发生明显变化,说明SR口7的表达变化可能只是 对盐胁迫的一种适应行为。 进一步研究了SR口7基因的表达在植物盐胁迫和干早胁迫中的作用。NaCI、 PEG和甘露醇抗性试验结果表明,SR07基因转化株的抗盐性与对照株相比没有 显著性差异(尸0.05),而PEG和甘露醇抗性与对照株相比有显著性差异(尸 0.05),推测SR口7基因表达蛋白可能在植物水分调节方面有重要作用。

下载App查看全文

(如何获取全文? 欢迎:、、)

支持CAJ、PDF文件格式


【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 董晓霞,赵树慧,孔令安,郭洪海,刘光栋;苇状羊茅盐胁迫下生理效应的研究[J];草业科学;1998年05期
2 李焰焰,董召荣,聂传朋,刘红权;盐胁迫下水杨酸及其衍生物对小黑麦幼苗生理特性的影响[J];生物学杂志;2005年03期
3 宋士清;刘微;郭世荣;尚庆茂;张志刚;;化学诱抗剂诱导黄瓜抗盐性及其机理[J];应用生态学报;2006年10期
4 李长鼎;谢应忠;;高羊茅抗盐性研究进展[J];农业科学研究;2007年01期
5 张文会;郭磊;郭彦;魏秀俭;孟萍萍;;植物生长激素对野生大豆耐盐性的影响[J];安徽农业科学;2007年05期
6 陈丹;刘延吉;吴阔;;盐胁迫对碱茅幼苗叶片内源激素的影响[J];安徽农业科学;2007年12期
7 白汝瑾;庄天明;刘杨;杨冬冬;陈火英;;利用双向电泳技术分离盐胁迫下番茄叶片蛋白[J];上海交通大学学报(农业科学版);2007年04期
8 贾文庆;刘会超;何莉;;盐分胁迫下白三叶种子的发芽特性研究[J];草业科学;2007年09期
9 孙景宽;刘俊华;陈印平;;孩儿拳种子萌发特性和抗氧化系统对盐胁迫的响应[J];种子;2009年01期
10 陈兰;黄广远;;多效唑对盐胁迫下高羊茅耐盐性的作用[J];草业科学;2009年08期
11 孙方行;周勃;孙明高;;盐胁迫对白榆光合的影响[J];林业实用技术;2009年11期
12 张璐;张倩;叶宝兴;;盐胁迫下丛枝菌根真菌(AMF)对紫花苜蓿生长的影响[J];山东农业科学;2010年03期
13 张宝红;盐胁迫对棉花组织培养的影响[J];河南农业大学学报;1994年03期
14 陈云昭,闫国华,魏爱丽,王玉国,白桦,冯文新;Ca对离体筛选耐盐大豆再生植株的影响[J];山西农业大学学报;1995年03期
15 黄宇翔,贾芬;盐胁迫下番茄愈伤组织过氧化物酶同工酶谱的变化[J];福建农业科技;1999年02期
16 孙小芳,郑青松,刘友良;盐胁迫下不同基因型棉花萌发生长和离子吸收特性[J];棉花学报;2001年03期
17 齐志广,张爱雨,孟伟娜,沈银柱;小麦拔节期盐胁迫对小麦近等基因系生理指标的影响[J];西北植物学报;2001年06期
18 孟学平,杨恒山,孙立杰,张永亮;盐胁迫对冬小麦叶过氧化物酶同功酶的影响[J];吉林农业大学学报;2002年01期
19 王仁雷,华春,刘友良;盐胁迫对水稻光合特性的影响[J];南京农业大学学报;2002年04期
20 陈桂平,马闻师,黄占景,沈银柱;小麦耐盐突变体盐胁迫下SIR73基因片段的分离和鉴定[J];遗传;2003年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 严顺平;苏维埃;汤章城;孙卫宁;;水稻根中盐胁迫响应蛋白的蛋白质组学的分析[A];中国蛋白质组学第二届学术大会论文摘要论文集[C];2004年
2 叶武威;喻树迅;王俊娟;樊宝相;赵云雷;;盐胁迫下棉花耐盐相关基因差异表达分析[A];中国棉花学会2008年年会论文汇编[C];2008年
3 赵福庚;刘友良;;盐胁迫下大麦根系多胺含量变化与耐盐性的关系[A];中国青年农业科学学术年报[C];2002年
4 孙健;王美娟;丁明全;邓澍荣;陈少良;;盐胁迫下胡杨调控细胞内K~+/Na~+平衡的生理和信号机制[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
5 华春;王仁雷;刘友良;;外源AsA对盐胁迫下水稻叶绿体活性氧清除系统的保护作用[A];中国植物生理学会全国学术年会暨成立40周年庆祝大会学术论文摘要汇编[C];2003年
6 杨俊诚;姜慧敏;张建峰;梅勇;;盐胁迫下植物对磷的吸收的研究[A];2004年全国学术年会农业分会场论文专集[C];2004年
7 高青海;王秀峰;杨凤娟;魏珉;任志雨;;LaCl_3对硝酸盐胁迫下黄瓜幼苗光合特性的影响[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
8 陈静波;刘建秀;;4种暖季型草坪草对盐胁迫的生长生理反应[A];中国草学会牧草育种专业委员会2007年学术研讨会论文集[C];2007年
9 张润花;郭世荣;李军;;外源腐胺对盐胁迫黄瓜幼苗生长,光合及叶绿素荧光参数的影响[A];中国园艺学会十届二次理事会暨学术研讨会论文摘要集[C];2007年
10 杨帆;丁菲;杜天真;;盐胁迫下构树幼苗各器官中K~+、Ca~(2+)、Na~+和Cl~-含量分布及吸收特征[A];第九届全国植物结构与生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘永军;小麦盐胁迫应答基因的分离克隆及转基因烟草表达模式研究[D];西北大学;2004年
2 陆一鸣;短芒大麦盐胁迫相关基因的克隆及其功能分析[D];中国人民解放军军需大学;2003年
3 单雷;小麦耐盐体细胞杂种盐胁迫应答基因的分离、定位及其耐盐机理研究[D];山东大学;2005年
4 严顺平;水稻响应盐胁迫和低温胁迫的蛋白质组研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2006年
5 刘永霞;硅对金丝小枣盐胁迫的缓解效应及其机理[D];南京林业大学;2007年
6 吴雪霞;外源一氧化氮对盐胁迫下番茄幼苗生理特性影响的研究[D];南京农业大学;2007年
7 于中连;烟草NADPH氧化酶在Na~+、Cu~(2+)胁迫中的活性变化及其作用[D];中国农业大学;2005年
8 杜伟;诱导型激活拟南芥突变体库的构建以及AtCRK3生化、表达分析[D];武汉大学;2005年
9 史仁玖;多枝赖草(Leymus multicaulis)盐胁迫应答相关基因的克隆及表达分析[D];南京农业大学;2005年
10 王俊生;延迟荧光检测技术及其在光合能力与胁迫检测中的应用[D];哈尔滨工业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 武金华;盐胁迫下紫杆柽柳cDNA文库构建及表达序列标签(EST)分析[D];东北林业大学;2004年
2 杨涓;盐胁迫下枸杞糖蛋白及糖代谢变化的研究[D];宁夏大学;2004年
3 于影;转柽柳LEA基因烟草耐盐性分析[D];东北林业大学;2006年
4 黄丽;槲寄生与寄主红树植物之间水分和营养研究[D];厦门大学;2009年
5 聂晶;五个垂直绿化树种的耐盐特性及耐盐性评价[D];山东农业大学;2004年
6 孙丽娜;水杨酸对盐胁迫下黄瓜生长发育及超微结构影响的研究[D];东北农业大学;2005年
7 周志文;葡萄种质资源的耐盐性鉴定及其生理基础的研究[D];山东农业大学;2003年
8 麻德平;外源NO和精胺提高高羊茅草耐盐性研究[D];郑州大学;2007年
9 张艳;NaCl胁迫下海滨锦葵光保护机制的研究[D];山东师范大学;2008年
10 许帼英;盐胁迫对木地肤种子萌发及幼苗生长的影响[D];新疆农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 记者 谢军;[N];光明日报;2005年
2 记者 邱曙东;[N];解放日报;2005年
3 ;[N];大众卫生报;2000年
4 肖文;[N];中国税务报;2007年
5 军事医学科学院 张迎辉;[N];医药经济报;2001年
6 记者 铁铮;[N];中国绿色时报;2002年
7 ;[N];天津日报;2005年
8 施燕;[N];中国教育报;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978


{bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育app}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bckbet}|
{uc8}| {uc8体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐城}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {UC体育}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}|