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    穿心莲内酯对ARDS小鼠肺泡促凝和纤溶抑制的调节及机制研究

    钱红  
    【摘要】:目的:了解穿心莲内酯(Andrographolide)对LPS诱导的ARDS小鼠肺泡促凝活性增强与纤溶过度抑制的调节作用并探究其可能机制。方法:将72只SPF级C57BL/6小鼠随机分为六组(n=12):空白对照组(Control组)、模型组(LPS组)、Andro低剂量组(LPS+2.5mg/kg Andro)、Andro中剂量组(LPS+5mg/kg Andro)、Andro高剂量组(LPS+10mg/kg Andro)及NEMO结合域肽(NBD)组(LPS+NBD);气道吸入LPS(200μg/50ul)诱导ARDS模型,LPS组气道吸入LPS(200μg/50ul),Control组吸入PBS(50ul),各Andro组在LPS气道吸入前30min用生理盐水将Andro稀释后分别按照2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg进行腹腔注射,每天一次、连续三天,LPS+NBD组在LPS气道吸入前30min予以气道吸入NBD(10ug/50ul);以LPS给药后8h为实验终点。通过苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变,肺组织湿干比重(W/D)评估肺水肿程度;实时荧光定量PCR(q-PCR)检测肺组织TF、PAI-1 m RNA水平,蛋白质印迹法(WB)检测肺组织TF、PAI-1蛋白表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)组织因子(TF)、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)、活化蛋白C(APC)以及肺组织Ⅲ型前胶原肽(PIIIP)含量;同时采用蛋白质印迹法(WB)检测肺组织磷酸化IKKα/β(p-IKKα/β)、p-IκBα、p-p65蛋白表达水平。结果:与Control组相比,Model组肺组织smith病理评分显著增高(p0.0001)、肺组织W/D显著增加(P0.0001);各Andro组肺组织病理评分及W/D均较LPS组明显降低,且随着Andro剂量增加其降低幅度越明显,差异有统计学意义(均P0.0001)。LPS组肺组织TF、PAI-1 m RNA及蛋白表达水平均显著高于Control组(均P0.05),各Andro组肺组织TF、PAI-1 m RNA和蛋白表达水平均较LPS组显著降低,且随着Andro剂量增加其降低程度越明显,差异有统计学意义(均P0.05)。与Control组相比,模型组BALF中TF、PAI-1、TAT以及PIIIP含量明显升高,差异有统计学意义(均P0.0001);各Andro组BALF中TF、PAI-1、TAT以及PIIIP含量较LPS组明显降低(均P0.0001),且随着Andro剂量的增加其下降幅度越明显,差异均有统计学意义(均P0.0001);APC则呈现出与上述相反的结果。LPS组肺组织NF-κBp65信号通路相关蛋白p-IKKα/β、p-IκBα以及p-p65表达较Control组明显增加,差异有统计学意义(均P0.0001);各Andro组肺组织p-IKKα/β、p-IκBα以及p-p65蛋白表达随着Andro剂量的增加较LPS组明显降低,呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(均P0.0001)。模型组肺组织NF-κB p65/DNA结合力较Control组显著增高,差异有统计学意义(P0.0001);与LPS组相比,Andro各组肺组织NF-κB p65/DNA结合力呈剂量依赖性降低,差异有统计学意义(均P0.0001)。上述LPS+NBD组各指标与LPS+10mg/kg Andro组结果相似。结论:穿心莲内酯处理在一定程度上纠正了ARDS肺泡促凝亢进与纤溶过度抑制,且呈剂量依赖性,同时能明显减轻肺组织损伤;穿心莲内酯对ARDS肺泡促凝增强与纤溶抑制的改善作用与其阻断NF-κB信号通路活化有关。


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