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基于链置换扩增和DNA酶的HIV相关基因荧光传感检测新方法研究

【摘要】:人类免疫缺陷病毒(HIV)可通过破坏感染者的免疫系统而导致获得性免疫缺陷综合症(AIDS)。免疫学检测方法如酶联免疫吸附分析(ELISA)和蛋白质印迹(WB)是用于HIV感染临床诊断的常用方法。然而,由于HIV感染后机体需要一段时间才能产生相应的抗体,因此HIV感染的免疫学检测存在“窗口期”,使HIV感染的早期诊断受到了挑战。核酸检测方法因其即使在没有HIV抗体存在的情况下也能提示病毒感染而受到广泛关注。因此,灵敏和特异地检测HIV相关基因对于HIV感染患者的早期准确诊断和治疗至关重要。链置换扩增(SDA)是一种高效的等温核酸扩增策略。此外,DNA酶因其具有循环剪切特性也可以用作信号放大单元。在本研究中,基于链置换扩增和镁离子依赖的DNA酶,构建了一种新型的荧光传感方法,用于快速检测HIV相关基因。当检测体系中存在靶DNA时,靶DNA可以与模板DNA链杂交并激活链置换扩增以产生大量DNA酶序列片段。随着镁离子的引入,DNA酶被激活从而循环剪切标有荧光基团和猝灭基团的底物链,使荧光基团和猝灭基团分离而荧光得以恢复。在最佳实验条件下,所构建的传感方法可实现对靶DNA在线性范围100 fM-1 nM的检测,检测限为61 fM,同时也能较好地区分靶DNA与错配DNA。此外,建立的荧光传感方法也成功用于分析加入人血清样本中的靶DNA。由于本荧光传感方法具有快速、简便和分析性能良好的优点,有望为临床HIV感染的早期诊断提供选择。

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