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灵龟八法按时开穴灸对AD大鼠海马Bax、Bcl-2等的表达及行为学的影响

【摘要】:目的:通过测定AD模型大鼠海马Bax蛋白、Bcl-2蛋白、乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT),血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量的变化,Bax、Bcl-2的基因表达,以及大鼠行为学的表达,来探讨灵龟八法开穴灸及不同灸量对以上指标影响的差异,为灵龟八法开穴灸治疗老年痴呆研究提供实验依据。方法:将50只健康SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾炷灸3壮组、艾炷灸6壮组、艾炷灸9壮组5个组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠均每天9时进行腹腔注射D-半乳糖400mg·kg~(-1),每日1次,连续5周,造成亚急性衰老和部分老年痴呆,从第6周开始连续3周按3mg·kg~(-1)的用量每日1次腹腔注射氢溴酸东莨菪碱溶液,最终制备成AD大鼠模型。造模结束后使用灵龟八法开穴灸治疗5周。治疗结束后第1天开始大鼠水迷宫行为学测定,前五天进行平台探索,最后1天撤回平台进行空间探索。水迷宫实验结束第二天处死五组大鼠,腹主静脉采血取血清,用酶联免疫法测定SOD、MDA、GSH-Px的含量的变化;采血完并处死,在冰台上取脑组织,分离海马,用酶联免疫法测定AChE、ChAT、Bax、Bcl-2;用RT-PCR检测海马Bax、Bcl-2基因表达。结果:⑴大鼠行为学表达模型组与正常组比较,痴呆大鼠模型找到平台所花费的时间明显比正常组多,穿过平台的次数明显比正常组少,差异均有统计学意义(p0.01);3组治疗组与模型组比较,找到平台时间减少,穿过平台次数增加,差异均有统计学意义(p0.01)。⑵大鼠海马AChE、ChAT模型组与正常组比较,大鼠海马AChE明显升高,ChAT明显下降,差异均有统计学意义(P0.01);治疗组与模型组比较,大鼠海马ACh E明显下降,ChAT明显升高,差异均有统计学意义(P0.01)。⑶大鼠海马Bax、Bcl-2蛋白及基因表达模型组与正常组比较,Bax蛋白和基因表达明显增加,Bcl-2蛋白和基因表达明显减少,差异均有统计学意义(p0.01);治疗组与模型组比较,Bax蛋白含量和基因表达明显减少,Bcl-2蛋白含量和基因表达明显增加,差异均有统计学意义(p0.01)。⑷大鼠血清SOD、MDA、GSH-Px的含量的变化模型组与正常组比较,血清中SOD明显下降,MDA明显升高,GSH-Px明显下降,差异均有统计学意义(P0.01);治疗组与模型组比较,血清中SOD明显升高,MDA明显下降,GSH-Px明显升高,差异均有统计学意义(p0.01)。⑸3个治疗组之间相互比较,各项指标差异不明显,均无统计学意义(P0.05),但6壮组和9壮组数据更佳。结论:⑴灵龟八法按时开穴灸能够提高AD大鼠行为学表达,增强记忆力,从而一定程度上改善痴呆症状。⑵灵龟八法按时开穴灸可提高AD大鼠SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量。⑶灵龟八法按时开穴灸能增加AD大鼠海马的Ch AT的活性,降低AchE活性。⑷灵龟八法按时开穴灸能增加AD大鼠海马Bcl-2蛋白含量和基因表达,降低Bax蛋白含量和基因表达。⑸不同壮数的灵龟八法按时开穴艾炷灸对AD大鼠的影响不大,但适当的增大灸量可以使效果更好。

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