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地衣芽孢杆菌产抗真菌物质的分离纯化

【摘要】:从土壤中分离得到一株对多种植物病原真菌具有抑制作用的菌株,将其命名为BS-3。该菌株对水稻纹枯病、稻瘟病、苦瓜枯萎病等病原真菌均有较强抑制作用。通过对菌株BS-3的16S rDNA的序列测定和同源性比对,发现它与Bacillus licheniformis、Bacillus subtilis、Bacillus amyloliquefaciens等菌种的16S rDNA有高达100%的同源性,结合形态和生理生化指标,将其鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。 以产抗真菌蛋白最佳培养基对地衣芽孢杆菌BS-3进行摇瓶发酵,选用受其抑制作用较明显的水稻纹枯病病原真菌瓜亡革菌(Thanatephorus cucumeris)作为指示菌,平板抑菌圈法检测BS-3发酵产物的抑菌活性。使用不同饱和度硫酸铵对BS-3菌株发酵液中的蛋白类物质进行盐析,确定最佳硫酸铵饱和度为50%。分别检测发酵上清液滤液、硫酸铵处理后离心沉淀和上清液的抑菌活性,结果表明BS-3的发酵上清液滤液、硫酸铵处理后离心沉淀对水稻纹枯病菌有较强抑菌活性。该抗菌蛋白粗提物具有较强热稳定性,对蛋白酶K和胰蛋白酶均有一定的耐受性。 地衣芽孢杆菌BS-3菌株抗菌蛋白粗提物经DEAE-52阴离子交换层析后,从洗脱峰Ⅲ检测到抑菌活性,随后将该洗脱峰经Sephadex G-75凝胶层析后,得到两个峰,其中峰Ⅱ检测到了抑菌活性。该活性峰分别经SDS-PAGE和平板聚焦电泳,均显示为单一蛋白带,获知该蛋白分子量在31.0kD左右,等电点为5.41。该活性峰经C18反相HPLC柱检测,抗菌蛋白纯度达98.25%。

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