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马尾松幼胚培养及幼茎愈伤组织诱导研究

【摘要】:马尾松(Pinus massoniana Lamb.)是重要的乡土速生针叶树种,有较高的综合利用价值,探索该树种的离体繁殖技术,建立快速繁殖体系,对该树种的遗传改良研究和开展基因工程研究工作奠定良好的理论和技术基础。 本文以马尾松幼胚、实生苗的幼嫩茎段为外植体,进行器官发生和愈伤组织培养研究,探讨了不同因素对器官发生或愈伤组织产生的影响。主要研究结果如下: 1.本研究分别采用了马尾松幼胚和幼嫩茎段作为外植体,在灭菌过程中,我们分别对它们进行了不同的处理,并比较分析了它们各自的灭菌效果,结果表明:在两种外植体的不同处理中,酒精在灭菌过程中作用比较显著,灭菌时间过短,灭菌不彻底,外植体容易受到感染;灭菌时间过长,虽然灭菌效果好,但由于外植体比较幼嫩容易受到损伤,导致外植体死亡。在对马尾松幼胚的灭菌过程中,最佳的消毒方法为:75%酒精表面灭菌30s,之后再用0.1%升汞浸泡8min,最后用无菌水冲洗5~6次;对马尾松幼苗灭菌最好的方法是采用75%的酒精浸泡20s,0.1%的升汞浸泡8min,最后用无菌水冲洗5~6次,其污染率和死亡率均最低,仅为3.71%。 2.在马尾松的直接器官发生的培养中,防治褐化的有效途径是在培养基中添加0.15g/LVc,且两天转接一次,以缩短外植体在原来培养基上的停留时间,减少褐化的几率。同时通过大量的比较分析,得出:在起始培养阶段,WPM培养基中的萌发率高于培养基GD和DCR,且其生长状况较好。BA、KT和NAA最适合的浓度水平分别为1mg/L、0.5mgm和0.15mg/L,NAA浓度过高使愈伤化程度加大。具体的来说,比较适合马尾松丛芽诱导的培养基组合为WPM+lmg/L BA+0.5mg/L KT+0.15mg/L NAA+0.15g/L Vc;在丛生芽的增殖和伸长培养中,最适宜的培养基组合是WPM+0.15mg/L NAA+0.15g/L Vc+0.5g/L Ac;生根培养中,效果最好的培养基组合为WPM+2mg/L IBA+0.15mg/L NAA+0.5g/L Ac,且生根培养基中添加蔗糖的浓度以20g/L为宜。 3.在马尾松的愈伤组织培养过程中,细胞分裂素与生长素的配比对外植体脱分化形成愈伤组织,起着重要的调控作用。因此必须通过不断调整各激素浓度之间的比例,以利于马尾松愈伤组织的诱导,本试验得出的诱导马尾松愈伤组织最佳的培养基组合为GD+2.5mg/LNAA。同时,通过大量试验和研究分析发现,NAA在马尾松愈伤组织的诱导中起着主要的调控作用,缺少NAA,愈伤组织就很难形成,由此可以看出,NAA是诱导愈伤组织的必需因子。 4.通过大量的比较分析,我们得出马尾松幼胚较马尾松幼嫩茎段的再生能力强,且比较容易诱导分化出再生小植株。

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