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鸡胚真皮间充质干/祖细胞分离培养与诱导分化研究

【摘要】:上世纪90年代,世界范围内开始了干细胞的研究,干细胞所具有的增殖与分化特性受到越来越多研究者的关注。干细胞的研究目前不仅包括分离培养与增殖,而且诱导分化的研究以及临床应用正越来受到重视。本实验以鸡真皮间充质干/祖细胞(Dermis-derived Mesenchymal Stem/progenitor Cells,DMS/PCs)为研究对象,建立了合适的体外培养体系,并进行了初步诱导分化方面的研究,取得了以下研究结果: 1、取16日龄鸡胚的皮肤组织,用0.25%DispaseⅡ37℃热消化1.5-2h,表皮层与真皮层分离,再用0.25%的胰酶消化15分钟用获得DMS/PCs,体外培养体系为:L-DMEM培养基,20ng/mL EGF,20ng/mL b EGF,2mM L-谷氨酰胺,1mM丙酮酸钠。 2、北京油鸡真皮间充质干/祖细胞在体外自我更新能力很强。体外培养时呈长梭形。原代培养时细胞较为混杂,有血细胞及成纤维细胞,经2-3次传代后细胞可被初步纯化。鸡真皮间充质干/祖细胞细胞的传代间隔时间约为72h,在体外培养时可传至16代。13代以内的细胞形态和增殖能力较为稳定,从第14代开始,细胞内出现空泡化现象,到第16代时细胞基本不再增殖,出现明显的衰老迹象,无法继续培养。 3、采用免疫荧光染色和RT-PCR方法检测培养细胞的标志基因,结果表明真皮多间充质干/祖细胞表达CD29、CD44、CD71、CD73等4种大部分间充质类干细胞都表达的标记物。 4、对体外培养的鸡真皮多能间充质干细胞进行了初步的诱导分化研究,在合适的诱导条件下,北京油鸡真皮间充质干/祖细胞能够诱导为成骨细胞、脂肪细胞、以及神经细胞。 结果表明,实验中分离培养的北京油鸡真皮间充质干/祖细胞在体外具有较强的增殖能力及多能性,而且取材方便、获得细胞量大、容易培养等特点,可以作为种子细胞保存濒危物种,并为日后利用真皮多能间充质干细胞进行临床治疗奠定了基础,同时也可为北京油鸡风味基因的优化和改良提供模型。

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