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地衣芽孢杆菌噬菌体的侵染能力及抗性菌株的诱变筛选

【摘要】:地衣芽孢杆菌是饲料上常用的益生菌之一,在地衣芽孢杆菌发酵生产中噬菌体的感染现象非常普遍。本文对地衣芽孢杆菌噬菌体性状以及抗噬菌体菌株的诱变筛选进行了研究。得到如下结果: (1)通过分离纯化,从地衣芽孢杆菌菌粉中得到2种噬菌体,命名为DB01和DB02,两种噬菌体对三株地衣芽孢杆菌TC侵染能力弱,宿主专一性强。经纯化培养后噬菌体的浓度最高达109pfu/mL以上。 (2)研究了生产环境噬菌体的分布及杀灭方法。生产工厂的土壤、空气、尘埃中地衣芽孢杆菌噬菌体平均含量分别达到1.7×105pfu/g、2.9×103pfu/g、6.0×104pfu/g,种类丰富。100℃湿热处理5min不能完全杀灭噬菌体;1.4%漂白粉在实验室可完全杀灭噬菌体,工厂使用2%漂白粉消毒,仍有极少量噬菌体存活。 (3)研究了噬菌体和温度对地衣芽孢杆菌的影响。菌体长得越好,噬菌体的数量越少。噬菌体污染严重时,菌数只能维持在50亿左右。北海从三月到到七月平均气温从19℃到34℃,平均气温28℃为临界点,高于临界点菌数可维持在100亿以上。 (4)研究了紫外线+亚甲基胍复合诱变条件。紫外线:20w紫外灯,距离40cm,照射3mmin,用报纸盖住存放11h,致死率在87%;亚甲基胍:20ug/mL,20min,致死率在98%,4℃冰箱冷藏一夜。诱变后得到地衣芽孢杆菌菌株抗性效价为3.75。 (5)根据抗性菌株易退化的特点,研究了噬菌体与抗性菌株共培养保持其抗性的方法。试验组采用103.25pfu/mL噬菌体浓度对抗性菌株进行保藏及种子液扩大传代培养,然后在噬菌体共存下进行固体发酵,菌数达到440亿/g;对照组采用无噬菌体存在的抗性菌株保藏并进行传代培养,然后在有噬菌体存在的条件下进行固态培养,其菌数仅为48亿/g,表明在抗性菌株的保藏、活化及扩大培养过程中有噬菌体存在有利于保持其菌株抗性。

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