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颞下颌关节滑膜间充质干细胞的实验研究

【摘要】:实验一 颞下颌关节滑膜间充质干细胞的分离与培养 目的 研究滑膜间充质干细胞的分离与培养。方法用2mg/mL的Ⅰ型胶原酶消化获得滑膜细胞,待细胞汇合后用有限稀释法进行单细胞克隆,筛选出滑膜间充质干细胞(SMSCs)。对SMSCs作细胞周期,免疫组织化学,流式细胞仪的检测与鉴定。结果体外培养的SMSCs,形成葵花样细胞集落,胞浆突起明显,相互连接成网状,免疫染色为波形蛋白阳性与角蛋白阴性。流式细胞仪检测发现有CD44、VCAM-1和ICAM-1的表达,但未检测到CD8,CD34,等表面分子的表达。结论 经体外纯化的单克隆的SMSCs可以表现为成纤维细胞的特性,表明来源于外胚层,且具有自我增殖与多向分化的特征。 实验二 颞下颌关节滑膜间充质干细胞成骨潜能的实验研究 目的 研究滑膜间充质干细胞的成骨潜能。方法用2mg/mL的Ⅰ型胶原酶消化获得滑膜细胞,待细胞汇合后用有限稀释法进行单细胞克隆,筛选出滑膜间充质干细胞(SMSCs)。取第三代SMSCs进行成骨诱导,每天观察细胞形态,并于培养7天后检测ALP活性和骨桥蛋白的表达,RT-PCR检测成骨细胞特异转录因子—核心结合因子al(core-binding factor α1,Cbfal)mRNA的转录;培养30天后作Von Kossa's染色,检测成骨化程度。结果 体外可诱导SMSCs定向分化为多形性成骨细胞,形成葵花样细胞集落,胞浆突起明显,相互连接成网状,细胞ALP染色阳性,骨桥蛋白强阳性,电泳结果显示有Cbfal的特异性条带,4周后矿化区经Von Kossa's染色呈阳性反应。结论 经体外纯化的SMSCs可定向诱导分化为成骨细胞,符合成骨细胞的生物学特征。

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