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三种西瓜病毒的基因克隆及植物表达载体构建

【摘要】: 本研究以从山西西瓜上分离纯化得到的西瓜花叶病毒2号(WMV-2)分离物为材料,用RT-PCR方法得到其外壳蛋白(CP)。基因的cDNA,经克隆和序列测定后,确认该基因是由846个核苷酸组成,可编码产生281个氨基酸。同源性比较分析结果表明,该基因的核苷酸序列及由此推导的氨基酸序列与已发表的4种WMV-2分离物CP基因相应序列同源性分别为92.8-93.9%和95.4-96.4%。WMV-2山西分离物CP的N端第10位氨基酸为Y,从而使对蚜传特性具有决定作用的结构域DAG改变为YAG。分别构建了含WMV-2 CP基因和ZYMV复制酶基因(NIb;缺失NIb保守序列GDD)的双价植物表达载体pBZW-31,含WMV-2CP基因、ZYMV复制酶基因(NIb;缺失GDD)和CMV复制酶基因(缺失GDD)的三价植物表达载体pBWCZ-44。并将此两种重组质粒分别转入根癌农杆菌菌株LBA4404中,供植物转化使用。

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