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基于磁球放大技术的电化学发光免疫分析研究

【摘要】: 论文的第一章研究了三联吡啶钌的N-羟基琥珀酰亚胺酯(Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS)修饰磁球的构建及其电化学发光(ECL)。首先合成了Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS并用红外光谱,紫外光谱,荧光光谱等方法对其进行了表征。然后利用线性扫描伏安法对Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS进行了ECL检测,ECL曲线的峰电位为1.25 V。采集到Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS ECL的光谱图,峰值在672 nm处。其ECL强度与同浓度的Ru(bpy)_3Cl_2溶液的ECL强度相当。然后构建了Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS修饰的生物素包被的磁球(Bio-磁球)及链霉亲和素包被的磁球(SA-磁球)。利用Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS上的酰基与链霉亲和素(SA)上的氨基发生偶联发应形成酰胺键,得到SA修饰的Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS(Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS-SA)。利用生物素与SA的特异性反应,将Bio-磁球与Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS-SA连接在一起,得到Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS修饰的Bio-磁球。Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS修饰SA-磁球的构建利用了磁球上SA的伯胺与Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS上的酯基反应形成酰胺键使Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS直接与磁球结合。结果表明,Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS修饰的这两种磁球可以产生较强的ECL。 论文的第二章提出了一种新的提高电化学发光免疫分析(ECLIA)灵敏度的方法:基于磁球放大技术的ECLIA方法。在此方法中,我们利用小鼠抗人CA125抗体上的氨基与硅烷化基底上的环氧基的反应将小鼠抗人CA125抗体固定在基底表面。经双抗夹心免疫反应,生物素与SA的特异性反应等形成磁球-抗体-目标抗原-抗体夹心复合体,然后将过量Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS-SA与固定在基底上的磁球复合体进行反应,形成了Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS标记的磁球复合体,然后进行ECL检测。由于一个磁球上结合了大量的Ru(bpy)_2(dcbpy)NHS,提高了电化学发光效率,从而提高了方法的灵敏度。本章还优化了实验条件(如BSA封闭时间,抗原抗体孵育浓度及孵育时间等)。在最佳条件下,实现了对人卵巢癌抗原CA125的定量测定,该方法的线性浓度范围为5.00×10~(-9)mol/L~1.00×10~(-7)mol/L。

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