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法医DNA的快速分型研究

【摘要】:DNA遗传标记在个体同一性认定、亲子鉴定及嵌合体分析等法医相关检测中具有很高的应用价值。DNA遗传标记的传统多重检测方法依赖特殊仪器、需要PCR后处理,容易造成实验室污染;现有的闭管检测技术多为单重检测,操作步骤随着检测位点数量的增多而增多,十分繁琐。因此,对于各类DNA遗传标记,有必要探究一种均相、多重、快速便捷的分型方法。第一章,对法医DNA分析进行了概述。同时,详细介绍了DNA遗传标记的发展。最后,阐述了本论文的研究内容和创新之处。第二章,利用多色探针熔解曲线分析技术(Multicolor Melting Curve Analysis,MMCA)建立了14管短串联重复序列(Short Tandem Repeats,STR)分型检测体系,检测DNA联合索引系统(Combined DNA Index System,CODIS)中的10个STR位点及1个性别鉴定位点。使用该体系对170份随机人群唾液基因组DNA标本进行检测并统计等位基因频率,各STR位点的等位基因频率均与文献报道的相近,体系的累积个体识别率(Cumulative Power of Discrimination,CDP)为0.999999999920,累积非父排除率(Cumulative Probability of Exclusion,CPE)为0.99945,在人群中具有较好的分辨率。该体系的检测总时长为2.5 h,是现有覆盖位点最多的STR均相检测体系。第三章,联合MMCA技术和加尾引物系统成功建立了多重单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism,SNP)分型检测体系,单管反应能够同时对9个SNP位点进行分型。体系的最低检测限为0.05 ng/μL(约相当于15拷贝/μL)人类基因组DNA,检测总时长为2.5 h,具有高灵敏度和快速检测的优点。使用该体系对238份随机人群唾液基因组DNA标本进行检测并统计等位基因频率,各位点的等位基因频率均与文献报道的相近,体系的CDP值为0.9997,在人群中具有较好的分辨率。作为一种均相、简便的多重SNP分型体系,该体系有助于推进SNP遗传标记数据库的开发和建立,具有良好的应用前景。第四章,利用熔解阵列法建立了单管四色十重插入缺失多态性(Deletion and Insertion Polymorphism,DIP)分型检测体系,单管反应中可以同时对10个DIP位点进行分型。体系能够对浓度低至0.05 ng/μL的人类基因组DNA标本进行准确分型,检测总时长为3.5 h。使用该体系对238份随机人群唾液基因组DNA标本进行检测并统计等位基因频率,各位点的等位基因频率均与文献报道的相近,体系的CDP值为0.99994,在人群中具有较好的分辨率。该检测体系具有灵敏度高、操作便捷、多重反应和耗时短的特点。第五章,对本论文进行了总结与展望。

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