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AEPS对RAW264.7细胞的免疫调控作用及其机制研究

【摘要】: 白藤梨为猕猴桃科植物毛花猕猴桃Actinidia eriantha Benth.的干燥根,《中药大辞典》记载具“清热、利湿、活血消肿、解毒”等功效。《全国中草药汇编》和《福建中医药》称其根能治胃癌、乳癌、食管癌和子宫体腺癌等。白藤梨多糖(Actinidia eriantha polysaccharides,AEPS)是从白藤梨中分离得到的水溶性总多糖,可显著抑制小鼠移植性S180肉瘤和H22肝癌的生长;提高荷瘤小鼠脾细胞增殖反应、自然杀伤(NK)细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性、脾细胞分泌IL-2和IFN-γ能力以及血清中肿瘤抗原特异性IgG、IgG2a和IgG2b抗体水平;增强卵清蛋白免疫小鼠的体液免疫和细胞免疫应答,诱生机体同时产生Th1型和Th2型免疫应答。同时,AEPS毒性小,无副作用,易于制备。因此,其作为具有免疫调节作用的抗肿瘤药物和疫苗免疫佐剂开发研究具有良好前景。 巨噬细胞(Macrophage)以不同形式广泛分布于机体不同组织中,是抵抗病原微生物感染的第一道防线之一,在天然免疫中发挥重要作用。巨噬细胞可通过直接吞噬作用清除外来病原微生物和肿瘤细胞,或间接通过分泌细胞因子和其它一些炎症介质发挥作用。近年来,大量体内外研究证实许多天然多糖对巨噬细胞功能具有调节作用。 基于AEPS具有显著的免疫佐剂活性和抗肿瘤作用,本实验选择小鼠RAW264.7巨噬细胞系为细胞模型,检测其对巨噬细胞增殖、吞噬活性、释放NO能力以及细胞因子产生的影响,研究了AEPS对巨噬细胞的免疫调控作用。并进一步采用RT-PCR检测对巨噬细胞炎症因子、趋化因子、TLR受体及其信号分子mRNA表达的影响,以及western-blot方法分析对RAW264.7细胞IκB-α和NF-κB p65蛋白表达的影响,探讨了AEPS对巨噬细胞免疫调控作用的可能机制。 AEPS能显著增强RAW264.7细胞的吞噬活性,并能浓度依赖性促进RAW264.7细胞释放NO的能力,以及分泌细胞因子TNF-α、IL-10和IL-6的水平。同时,AEPS也能显著上调RAW264.7细胞炎症因子、趋化因子的基因表达,且呈时间、浓度依赖性关系。这些结果说明:AEPS对巨噬细胞的功能具有显著的增强作用。TLR受体及其介导的信号分子PCR分析结果表明:AEPS能浓度依赖性、显著上调TLR2、TLR9、TRIF和NF-κB等基因的表达水平;Western-blot检测结果显示:AEPS能显著提高RAW26.7细胞胞浆内IκB-α和NF-κB p65蛋白的表达水平。这些结果说明:AEPS对巨噬细胞的调控作用机制可能与其上调TLR基因表达从而激活NF-κB有关。本实验结果为AEPS的进一步开发研究提供了科学依据。

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