收藏本站

未成熟树突状细胞联合骨髓移植诱导大鼠异体肾移植免疫耐受的研究

【摘要】: 器官移植作为现代医学的重大进步,已经广泛应用于治疗各种终末期器官功能衰竭的病人。然而移植排斥反应仍然是目前器官移植领域的最大难题。免疫抑制剂的使用虽然降低了排斥反应的发生率,但是却带来许多难以克服的副作用。目前移植学界普遍认为解决移植排斥反应的最终出路在于诱导受体产生免疫耐受。 免疫耐受作为一种特殊的免疫应答,其诱导方式具有一定的复杂性。T细胞处于免疫排斥反应中心环节,其激活过程一方面需要TCR与MHC-多肽复合物的特异性结合,另一方面还需要共刺激通路的信号放大作用。未成熟树突状细胞表面缺乏B7-1、B7-2和CD40等共刺激分子,在异体移植时,不能有效递呈抗原,激活T细胞,导致免疫耐受的形成。未成熟树突状细胞被视为诱导免疫耐受的有效手段。另一方面,大量临床观察和实验已经证实异基因嵌合体与成功的免疫耐受之间关系密切。骨髓细胞中含有大量造血干细胞,具有很强的增殖与分化潜能,容易形成嵌合体而诱导免疫耐受。因此骨髓移植也被视为诱导免疫耐受的重要手段之一。鉴于此,我们考虑在大鼠异体肾脏移植模型上,利用供体来源的未成熟树突状细胞诱导受体T细胞低应答的特性,在这一短暂的免疫低反应期内,联合骨髓移植,使得异基因细胞在受体内生存并繁殖,从而建立稳定的免疫耐受状态,为临床延长移植肾脏存活时间提供新思路。 第一部分 体外未成熟树突状细胞的培养、鉴定和功能评价 目的:体外采用抑制性细胞因子白介素-10(IL-10)抑制树突状细胞成熟过程,观察未成熟树突状细胞的表型和体外免疫调节功能,为进一步诱导大鼠异体肾脏移植免疫耐受提供理论依据和治疗手段。 方法: 1. 大鼠骨髓细胞的制备:无菌取大鼠胫骨和股骨骨髓,0.83% Tris-NH4Cl溶液使红细胞充分溶解。离心后重复洗涤一次。调整细胞浓度为2×108/ml备用。 WP=7 2. 未成熟树突状细胞的培养:按上法取新鲜骨髓细胞,经小鼠抗大鼠系列单抗和补体,将剩余阴性选择的细胞加入正常人血清包板的培养皿中,1h后吸取上清中非贴壁细胞。含rrGM-CSF(10ng/ml)、rrIL-4(8ng/ml)的RPMI1640培养基调整细胞浓度至1×106/ml,置于1%明胶包板的6孔板中培养;培养至第5天,收集疏松贴壁的增殖性细胞聚集体,按加入细胞因子不同分为两组:IL-4组, 继续在原培养基中培养;IL-10组,上述培养基中加入IL-10(10ng/ml),培养至第13天,收集细胞。 3. 树突状细胞纯度和表型分析: 分别收集不同培养条件下树突状细胞,加入PE或FITC标记的抗大鼠CD80、CD86、OX6、OX62单克隆抗体,流式细胞仪(FACScan USA)进行表型分析。 4. 树突状细胞吞噬功能分析:分别收集不同培养条件下树突状细胞,加入FITC-Dextran,置于4℃(对照组)和37℃(实验组)。2h后取出,流式细胞仪定量分析树突状细胞吞噬功能。 5. 初次混合淋巴细胞反应:分别收集不同培养条件下Lewis大鼠树突状细胞,灭活增殖性,作为刺激细胞。取正常DA大鼠脾脏,尼龙毛吸附法制备纯化T细胞,作为反应细胞。刺激细胞与反应细胞按1:10、1:20和1:40混合培养,β-液体闪烁计数仪测定CPM值,计算刺激指数(SI)。 6. 再次混合淋巴细胞反应:上述刺激细胞与反应细胞按1:10共同培养5天,作为再次反应细胞。Lewis、DA及无关第三品系Wistar大鼠来源的脾淋巴细胞,灭活增殖性,作为再次刺激细胞。再次刺激细胞与再次反应细胞以1:1、1:2、1:4及1:8混合培养,做再次MLR。计算刺激指数(SI)。 7. T细胞杀伤活性测定:利用51Cr释放实验测定CTL细胞毒效应。再次反应细胞作为效应细胞;Na251CrO4标记的Lewis、Wistar及DA大鼠来源的脾淋巴细胞作为靶细胞。效应细胞:靶细胞为20:1,γ计数仪测定CPM值,计算杀伤率。 8. 树突状细胞培养上清IL-12水平检测:在树突状细胞培养不同时间分别收集IL-4组和IL-10组半量换液之离心上清,IL-12检测采用抗体夹心ELISA法。 9. 初次反应细胞上清IL-2水平检测:细胞培养上清IL-2水平检测采用双抗体夹心ELISA法。 结果: 不同细胞因子刺激下和不同培养时间树突状细胞的生长情况和形态:大鼠树突状细胞呈现半悬浮生长状态。培养至第3天,可见部分细胞附壁生长,在第5天出现毛刺状细胞,随着培养时间的延长,IL-4组此类细胞数量增多,毛刺状突起更加明显,并逐渐脱壁;至第13天,可以观察到形态 WP=8 1. 均一、毛刺状聚集成簇的成熟树突状细胞;IL-10组树突状细胞毛刺状和聚集体不明显,仍停留在未成熟状态。 2. 树突状细胞表型分析: IL-4组及IL-10组树突状细胞在培养结束时表面表达OX62(大鼠树突状细胞表面标志)的细胞比率分别为82.3%±6.7%和79.6%±4.6%,两组比较,无明显差异(P0.05),说明利用IL-10不影响树突状细胞分化与扩增,可以获得较高纯度的未成熟树突状细胞。IL-4组共刺激分子CD80和CD86表达水平分别为60.2±7.1%和72.4±8.3%,MHC-II类分子OX6表达水平为61±4.5%;IL-10组树突状细胞表面CD80和CD86表达水平分别为25.3±4.6%和42.4±5.2%,OX6表达水平为32.3±9.6%;两组比较,差异具有显著性(P0.01),说明IL-10能够抑制树突状细胞的成熟过程,阻断其表面共刺?

下载App查看全文

(如何获取全文? 欢迎:、、)

支持CAJ、PDF文件格式


【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘茂如;镉生产时混合性粉尘致病作用的评价[J];中国职业医学;1982年05期
2 王簃兰;芳香族烃类经皮肤的渗透量[J];国外医学.卫生学分册;1982年01期
3 张寅恭;新杀虫剂Пиримор的卫生毒理学[J];国外医学.卫生学分册;1982年01期
4 蔡海英,张金生,崔小邢,郑国墚,黄孔威;国产维甲酸衍生物对大鼠食管上皮癌变的抑制作用[J];癌症;1983年04期
5 高强;大鼠直肠给心得安以避免首过消除效应[J];国外医学.药学分册;1983年01期
6 Seigo SHUMIYA;Sumi NAGASE;蔡华琬;;大鼠(Rattus Norvegicus)无白蛋白基因(Aualbumia)和盖帽基因(Hooded)的连锁[J];实验动物与比较医学;1983年01期
7 陈国志,黄淑英,王广义,刘志红;豚鼠和大鼠小肠移行性肌电复合波(MMC)的观察[J];基础医学与临床;1984年03期
8 横路谦次郎;不同类型辐射照射复合催乳素诱发大鼠乳腺肿瘤的效果[J];辐射防护;1984年03期
9 温志永;;幼鼠夜间PR 峰的出现对孕酮的依赖作用[J];国外医学.妇产科学分册;1989年05期
10 赵学增;郑富稳;夏烨;;普萘洛尔对雌性大鼠生殖机能的影响[J];河北医科大学学报;1989年03期
11 郑培敏;熊克仁;江家元;;大鼠斜角带核水平支的传入和传出联系——WGA—HRP和HRP法研究[J];皖南医学院学报;1989年04期
12 韦志康,王玉民,伦明跃,徐琳,李云华,邓志诚,吴浩阳;~(241-)镅和~(238-)钚诱发的大鼠骨肉瘤瘤细胞系生物学特性的比较[J];癌变.畸变.突变;1990年01期
13 张玉林,程鸿,秦震;大鼠大脑中动脉阻断导致局灶脑梗塞[J];复旦学报(医学版);1990年03期
14 邹爱平;654-2和多巴胺对大鼠肾脏微循环作用的比较[J];中国病理生理杂志;1991年06期
15 陈启盛,戴义隆,沈上,田苏平;迷走神经与应激性胃粘膜损害的关系[J];南京医科大学学报(自然科学版);1991年02期
16 迟焕方,王守彪,李相民,李良;大鼠中缝核及其邻近网状结构5-羟色胺能神经元的细胞构筑[J];青岛大学医学院学报;1991年04期
17 朱望,周明非,孙向伟,李静,韩洁,王彦;雄激素对大鼠骨骼肌纤维运动终板超微结构的影响[J];神经解剖学杂志;1991年02期
18 王景梓;周序斌;张黎华;吴葆杰;;二十二碳六烯酸抗心血管病作用的研究——Ⅱ.精制鱼油对大鼠血小板聚集功能的影响[J];山东大学学报(医学版);1991年01期
19 张苏;黄威权;王祖禄;蔡晚霞;苏慧慈;;失血性休克对大鼠胰岛生长抑素免疫反应阳性细胞的影响[J];解剖学报;1991年S1期
20 段重高,王莉,李宏伟,成桂仁;三七皂甙对大鼠脑微循环的影响[J];中国病理生理杂志;1992年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 程井军;吴其恺;彭锐;孙国杰;;电针对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织氧化及抗氧化状态的影响[A];中华中医药学会第十三届内科肝胆病学术会议论文汇编[C];2008年
2 杨珺超;宋康;鲁建锋;陈君峰;夏永良;;补肺汤对肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β1作用的实验研究[A];2009年中华中医药学会内科分会全国中医内科临床科学研究专题研讨会论文汇编[C];2009年
3 廖慧慧;李芳;何燕萍;;罗氏内异方对子宫内膜异位症模型大鼠内膜整合素a vβ 3表达的影响[A];第九次全国中医妇科学术大会论文集[C];2009年
4 王进荣;王平;孟宪丽;杨永茂;张艳;;单向肠灌流法研究芦荟大黄素的大鼠在体肠吸收[A];第十一届全国中药药理学术大会论文摘要[C];2010年
5 史大卓;;接种Walker256肉瘤对急性心肌梗死大鼠缺血心肌血管新生的影响[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
6 方杰;胡昔权;郑海清;潘三强;李莉莉;;运动训练对脑梗死大鼠室管膜下区神经新生的影响[A];中国康复医学会第十三届全国脑血管病康复学术会议会议指南[C];2010年
7 孙琳;郭春妮;赵永波;;BM6在Aβ致大鼠海马神经元损害中保护作用的研究[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师(学术)论坛论文汇编[C];2011年
8 徐存拴;李三强;周爽;;麻醉对大鼠应激反应的影响[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
9 朱萱萱;王广基;刘建平;王淑云;徐轩;;口腔膜治疗实验性大鼠口腔膜溃疡的研究[A];中国制药工业药理学会20周年学术会议论文集[C];2002年
10 舒清明;张永亮;李灵芝;何冰;李志强;;蛋白质芯片技术检测脑损伤大鼠血清差异蛋白[A];中国生理学会应用生理学专业委员会暨《中国应用生理学杂志》二十周年纪念大会和学术讨论会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李明波;大鼠掠食行为的神经生物学探讨[D];中南大学;2012年
2 甘贤兵;慢性心力衰竭大鼠心交感传入反射的增强机制研究[D];南京医科大学;2012年
3 杨建新;腹部术后疲劳综合征模型及抗术后疲劳方作用的研究[D];湖北中医学院;2004年
4 杨丹榕;大鼠IgEFcCH2-3受体阻断与IgEFcCH2-3-FasL诱导肥大细胞凋亡的研究[D];第二军医大学;2004年
5 李玉茹;神经营养素及其受体在老年性大鼠耳蜗及下丘中表达规律的研究[D];吉林大学;2005年
6 陈党红;舒筋颗粒对卒中后肌张力增高的影响及可能作用机制探讨[D];广州中医药大学;2005年
7 卢奕;人羊膜细胞在创伤性脑损伤中应用的实验研究[D];苏州大学;2005年
8 潘静薇;NOGO-B在动脉粥样硬化病变中差异表达的研究[D];第二军医大学;2006年
9 王连友;大鼠液压冲击颅脑损伤模型的立体定向控制研究[D];天津医科大学;2006年
10 陈来照;神经肽Y及其受体在垂体腺瘤中的表达及意义[D];天津医科大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冷婧;限食下活性维生素D对大鼠寿命的影响[D];山西医科大学;2013年
2 孙超;硫化氢对烧伤大鼠肠道组织干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α水平的影响研究[D];青海大学;2013年
3 向芳;围产期大鼠血脂组成与乳腺炎症相关基因的表达变化研究[D];四川农业大学;2011年
4 吴芳庚;环境温度变化致大鼠小肠黏膜免疫屏障损伤的研究[D];南昌大学;2011年
5 郭亚玲;LOX-1和VCAM-1在糖尿病肾病动脉粥样硬化大鼠中的表达及普罗布考的影响[D];蚌埠医学院;2013年
6 张智;培菲康对高脂饮食诱导非酒精性脂肪肝病大鼠肠黏膜屏障的作用[D];广西医科大学;2013年
7 耿立敏;牛磺酸对染锰大鼠丘脑氨基酸类神经递质及其相关酶改变的干预作用[D];广西医科大学;2013年
8 杨科峰;基于BCI的大鼠运动行为控制的研究[D];郑州大学;2011年
9 贾涛;麻醉大鼠肠系膜微循环局部酸环境对微血管反应性的影响[D];山西医科大学;2013年
10 钟丽敏;中枢M受体参与毒血症大鼠星形胶质细胞激活及细胞因子分泌的研究[D];苏州大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;[N];中国医药报;2003年
2 刘霞;[N];科技日报;2011年
3 ;[N];中国中医药报;2005年
4 郑健刚;杜元灏;石学敏;[N];中国医药报;2005年
5 ;[N];中国医药报;2003年
6 ;[N];中国中医药报;2005年
7 ;[N];中国中医药报;2005年
8 孙忻;[N];科技日报;2003年
9 记者 许琦敏;[N];文汇报;2010年
10 阿胜;[N];医药经济报;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978


{bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育app}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bckbet}|
{uc8}| {uc8体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐城}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {UC体育}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}|