bck

收藏本站

C反应蛋白对树突状细胞免疫功能的调控作用与分子机制

【摘要】:免疫炎症反应是冠状动脉粥样硬化性心脏病(Coronary heart disease, CHD)发生发展的重要病理生理机制。C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)是目前使用最广泛的炎症标志物之一,并被一致认为是CHD一个重要的风险预测指标。然而,关于CRP与CHD之间的因果关联,目前国际上却存在很大的争议。 树突状细胞(Dendritic cells, DCs)启动并调控机体的免疫炎症反应,构成CHD炎症机制的中心环节。在我们前期研究中,已发现氧化低密度脂蛋白和糖基化终末产物等CHD危险因素能激活DCs免疫炎症反应,同时,也关注到一些抑制CHD进展的物质或药物能减轻DCs免疫炎症。文献报道,DCs表达CRP受体——CD32,提示CRP对DCs具有一定的调节功能。但是,关于CRP是启动还是抑制DCs免疫炎症,国际上存在完全相反的报道;而关于CRP调控DCs的分子机制,也极少有文献报道。 鉴于DCs在CHD慢性炎症机制中的重要地位以及文献报道CRP对DCs免疫炎症调控作用的分歧,尤其是CRP与CHD之间因果关联的广泛争议,我们开展了本研究,探讨CRP调控DCs的免疫功能及其分子机制,为进一步阐明CRP与CHD的因果关联提供证据。 第一部分C反应蛋白对树突状细胞免疫表型与功能的调控作用 目的:探讨CRP对DCs免疫表型、细胞因子分泌、以及刺激T细胞增殖等功能的影响。 方法:(1)采用免疫磁珠分选CD14+单核细胞,经细胞因子诱导分化为人外周血单核源性树突状细胞(monocyte-derived dendritic cells, MoDC);(2)分组:未干预组、不同浓度CRP (5,15,3μg/mL)组和脂多糖(lipopolysaccharide, LPS,100ng/mL)阳性对照组,在48小时分别收集细胞与上清;(3)流式细胞技术检测MoDC免疫表型;(4)定量PCR结合ELISA方法检测IL-12、IL-10、TNF-a和IL-6炎症细胞因子;(5)免疫磁珠方法分选CD4+CD45RA+T细胞,分别将经CRP (30μg/mL)和LPS (100ng/mL)诱导48小时的MoDC与T细胞按照1:5、1:10和1:20比例进行混合培养,采用同种异体混合T细胞增殖实验来检测CRP和LPS对T细胞增殖的影响。 结果:(1) MoDC经形态学鉴定,培养成功;(2)流式细胞检测结果表明,CRP(15和30ng/mL)上调CD80和CD86(p0.05),而对其他的免疫表型分子(CD83、 CD40和MHC-II)作用并不明显(p0.05), LPS显著上调CD80、CD86、CD83、 CD40和CDla的表达(p0.05);(3)定量PCR和ELISA结果一致表明,CRP(30μg/mL)对IL.12的表达无明显促进作用(p0.05),对IL-10的表达有下降趋势(p0.05);(4)CRP显著下调TNF-α mRNA的表达(p0.05),对IL-6mRNA表达无明显作用(p0.05);而LPS显著上调细胞因子IL-12、IL-10、TNF-α和IL-6的表达(p0.05);(5) CRP不能促进T细胞增殖,反而有一定的抑制趋势(p0.05), LPS显著促进T细胞增殖反应(p0.05),其中以DC:T=I:10作用最强。 结论:(1)LPS促进DCs成熟,并激活T细胞反应,这与以往文献报道一致,表明实验体系稳定。(2)CRP部分上调免疫表型分子,但并不上调炎症因子分泌,也不能促进T细胞增殖。有理由认为,CRP诱导DCs呈半成熟状态,从而发挥负向免疫调控和维持免疫稳态的作用。 第二部分CRP与LPS刺激DCs的全基因组表达谱芯片检测与分析 目的:探讨CRP与LPS两者调控DCs免疫功能及其分子机制之间的异同。 方法:(1)培养MoDC(来自3名健康男性献血者),分为对照组、CRP(30μg/mL)组和LPS (100ng/mL)组,在48小时收集细胞,抽提RNA,采用Affymetrix affymetrix u133plus2.0表达谱芯片检测其全基因组表达水平;(2)采用TwoClassDif方法进行差异基因筛选;(3)采用在线MAS2.0软件进行基因功能(GO/Biological function)与信号转导通路(PATHWAY/KEGG)分子注释分析;(4)基于CRP诱导DCs的差异表达基因,构建信号转导网络(Signal-Net)。 结果:(1)RNA质检符合芯片要求;(2)CRP与对照组的差异基因有815个,其中CRP特异诱导的差异基因为613个(432个上调/181个下调);LPS与对照组差异基因1477个,其中LPS特异诱导的差异基因为1303个(804个上调/499个下调)。此外,有少数差异基因为CRP与LPS所共有;(3)CRP特异下调的差异基因中,与DCs免疫功能密切相关的显著性GO主要包括:炎症反应和趋化;所参与的显著性:PATHWAY主要有:TOLL样受体信号途径、细胞因子-细胞因子受体相互作用和细胞黏附分子信号途径等;(4)LPS特异上调的差异基因中,与DCs免疫功能密切相关的显著性GO主要有:正调控NF-KB途径、正调控IL-2合成与IL-4合成、正调控IL-6合成以及对Y-干扰素(IFN-γ)的反应等;所参与的显著性PATHWAY主要有:TOLL受体信号途径、细胞因子-细胞因子受体以及细胞黏附分子信号途径、B细胞受体信号途径和T细胞受体信号途径等;(5)CRP差异基因分子注释中,存在一些与脂代谢密切相关的基因所组成的显著性GO如:脂蛋白代谢和胆固醇合成、以及PATHWAY如:短链脂肪酸代谢途径、脂联素细胞因子信号途径和PPAR-γ信号途径等。(6) Signal-Net图中所筛查到的基因主要有两大类,一类为趋化因子和受体及其相关的转录因子,其表达均显著下调,包括CCL2(MCP-1)、CCL3(MIP-1α)、CCL4(MIP-1β)、 CCL7(MCP-3)、CXCL1-CXCL3、CX3CR1以及转录因子——活化T细胞核因子1等;另一类为调控细胞周期并与细胞凋亡相关的基因,如CDKN1B(p27.kipl)、 CCND1、CCND2、CCNE2以及PTEN和FOXO1等。 结论:高通量数据筛选结果揭示,(1)与LPS诱导DCs成熟和启动免疫炎症反应相反,CRP抑制DCs免疫炎症相关基因的表达,包括炎症细胞因子的合成以及趋化因子及其受体的表达;(2)CRP可能具有独立于LPS的调控DCs参与脂代谢的作用;(3)CRP可能通过改变与细胞凋亡密切相关的基因的表达而影响DCs的寿命。 第三部分C反应蛋白调控树突状细胞维持免疫稳态的分子机制的初步研究 目的:验证并检测Signal-Net图中CRP对DCs表达凋亡相关基因如PTEN、 FOXO1和CDKN1B(p27.kipl)的影响,探讨CRP调控DCs以维持免疫稳态的分子机制。 方法:(1)培养MoDC,干预和分组同第二部分;(2)定量PCR验证CRP和LPS对MoDC表达PTEN,FOXO1和CDKN1B(p27.kipl)的影响;(3)WesternBlot检测CRP和LPS对MoDC表达上述蛋2的作用,并检测Caspase-7和PARP的表达;(4)采用流式细胞技术分析CRP和LPS对MoDC凋亡的影响。 结果:(1)定量PCR和Western Blot结果均显示,CRP显著诱导PTEN和CDKN1B(p27.kipl)表达上调,对FOXO1也有一定上调作用;而LPS诱导FOXO1显著上调,对CDKN1B(p27.kipl)表达也有上调趋势;(2) Western Blot结果表明,CRP和LPS均上调Caspase-7和PARP的表达,并显著增加其裂解产物;(3)CRP和LPS均能够诱导MoDC发生凋亡。 结论:(1)CRP上调PTEN、FOXO1和CDKN1B(p27.kipl)的表达,其结果与芯片检测结果一致;(2)CRP可能通过上调PTEN、FOXO1和CDKN1B(p27.kipl)的表达,激活Caspase-7并裂解PARP,以诱导DCs凋亡,从而负向调控DCs免疫炎症并维持DCs免疫稳态。 全文总结 1、与LPS诱导DCs成熟并启动免疫炎症相反,CRP诱导smDC形成,抑制DCs免疫炎症相关基因,包括下调CC型和CXC型趋化因子的表达,从而负向调控DCs免疫炎症。 2、CRP上调抑癌基因PTEN、FOXO1和CDKN1B(p27.kipl)表达,激活Caspase-7并裂解PARP,以诱导DCs凋亡,从而维持DCs免疫稳态。 潜在价值和创新点 1、发现CRP诱导smDC形成,初步证明CRP抑制DCs免疫炎症相关基因表达,包括诱导CC型和CXC型趋化因子表达下调,从而负向调控DCs免疫炎症; 2、初步揭示CRP通过上调抑癌基因PTEN、FOXO1和CDKN1B(p27.kipl)表达,激活Caspase-7并裂解PARP,从而诱导DCs凋亡,以维持DCs免疫稳态; 3、本实验结果丰富了对DCs免疫炎症调控机制的认识,为今后深入研究DCs负向免疫的调控机制及其在CHD中的作用开辟了新思路。

下载App查看全文

(如何获取全文? 欢迎:、、)

支持CAJ、PDF文件格式


【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 常凌爱,路士华,杨莉;树突状细胞在免疫学中的作用[J];邯郸医学高等专科学校学报;1999年01期
2 刘恩梅,罗嘉慧,涂文伟,刘宇隆;胰岛素样生长因子1诱导脐血CD14~+单核细胞转化树突状细胞分化成熟的研究[J];中华儿科杂志;2001年11期
3 刘福生,王忠诚,历俊华,林松,任铭,肖庆,张亚卓;肿瘤抗原致敏树突状细胞瘤苗治疗颅内胶质瘤的实验研究[J];中华神经外科杂志;2002年02期
4 刘美娜;树突状细胞与妇科肿瘤生物治疗[J];国外医学.妇产科学分册;2002年06期
5 吴军,王捷,杨太成,赖晃文,郑文岭,王晓怀;钙离子载体对外周血单核细胞来源的树突状细胞的影响[J];细胞与分子免疫学杂志;2003年01期
6 徐敏,程书榜,王成友,郑凯;胃癌微环境中树突状细胞浸润的临床意义[J];中华胃肠外科杂志;2003年05期
7 杨吉伟;;人外周血树突状细胞体外培养与扩增的研究进展[J];国外医学.老年医学分册;2003年02期
8 练诗梅,王晓波,薛祖光,张旗,孙健,荒木弘一;脐血来源树突状细胞的体外诱导及扩增[J];中国实验血液学杂志;2004年05期
9 黎阳,包蓉,黄绍良,吴燕峰,魏菁,周敦华;诱导脐血单个核细胞分化为树突状细胞的实验研究[J];中国当代儿科杂志;2004年05期
10 赵岐刚,田小侠,张书广;乙肝疫苗负载的树突状细胞诱导慢性乙型肝炎患者特异性免疫应答[J];齐鲁医学检验;2004年03期
11 吴淼,余佩武,曾冬竹,雷晓,赵永亮,朱自满,王自强;负载NDV-ATV的树突状细胞诱导的抗胃癌效应研究[J];消化外科;2005年03期
12 顾克菊,张建芳;树突状细胞介导的肿瘤免疫治疗研究[J];国外医学.免疫学分册;2005年03期
13 张中伟;秦环龙;;肠道树突状细胞的特性及功能研究[J];世界华人消化杂志;2006年22期
14 胡茂志;戴华;焦新安;张辉;潘志明;高明燕;程宁宁;刘秀梵;;小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导[J];中华微生物学和免疫学杂志;2007年10期
15 侯静;张连生;柴晔;宋飞雪;刘瑛;曾鹏云;吴重阳;岳玲玲;李莉娟;;调节性T细胞对树突状细胞作用的实验研究[J];中国实用内科杂志;2007年S1期
16 王红祥;赵湜;毛红;李宾公;邹萍;;脂肪基质干细胞对异基因树突状细胞功能的影响及机制探讨[J];华中科技大学学报(医学版);2008年01期
17 杨丽红;;树突状细胞生物学特征及功能的研究进展[J];黑龙江医药科学;2010年05期
18 丁洁;;AIDS和AIDS相关综合征患者末梢血树突状细胞:高强度Ⅱ类抗原表达和功能的表达[J];国际免疫学杂志;1988年06期
19 刘津红,高乃庄,郑武飞;树突状细胞对早期自身免疫性甲状腺炎的诱导作用[J];中国免疫学杂志;1990年06期
20 王玉坤;;多中心网状组织细胞增生症免疫组织学和超微结构的研究:树突状细胞株的病理学[J];国际皮肤性病学杂志;1993年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘修恒;;小鼠骨髓源性不同成熟度树突状细胞培养鉴定[A];第十七届全国泌尿外科学术会议论文汇编[C];2010年
2 张庆红;胡玉珍;吕顺艳;钟延清;;雌激素影响大鼠树突状细胞的分化、成熟和功能[A];中国生理学会第六届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2003年
3 郭大伟;梁健;姜晓峰;王学范;魏云涛;姜洪磊;;GPC3基因转染的树突状细胞诱导抗肝癌HepG2细胞杀伤作用的研究[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年
4 张新华;钟翠平;顾云娣;顾晓;范强;王国强;周播江;;TGF-β1基因转染树突状细胞增强移植心脏耐受性并降低Fractalkine的表达[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
5 于益芝;刘书逊;王文雅;张明徽;郭振红;徐红梅;齐润姿;安华章;曹雪涛;;TRAIL在树突状细胞杀伤活化T细胞中的作用[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
6 尤长宣;罗荣城;张军一;苏瑾;廖旺军;郑航;Paul L Hermonat;;基因转移制备树突状细胞的实验研究[A];第一届中国肿瘤靶向治疗技术大会论文集[C];2003年
7 葛长勇;李鸿钧;孙茂盛;冯婷婷;靳昌忠;姚航平;吴南屏;;灭活SV40致敏的猴树突状细胞的生物学特性研究[A];2008年浙江省感染病、肝病学术年会论文汇编[C];2008年
8 葛长勇;李鸿钧;谢天宏;张光明;易山;孙茂盛;吴南屏;;恒河猴树突状细胞的生物学特性研究[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年
9 张尧;靳风烁;兰卫华;李彦峰;张克勤;吴刚;叶锦;;联合应用塞莱西布和CpG-ODN对树突状细胞功能的影响[A];第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C];2008年
10 夏强;刘卫彬;陈振光;张莹;黄如训;;胸腺成熟树突状细胞与重症肌无力发生的相关性分析[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴超能;C反应蛋白对树突状细胞免疫功能的调控作用与分子机制[D];复旦大学;2010年
2 潘建平;γ-干扰素对树突状细胞分化和功能成熟的调控及其基因修饰的树突状细胞抗肿瘤免疫机制研究[D];浙江大学;2002年
3 朱伟国;PPAR-γ激动剂吡格列酮抑制血管紧张素Ⅱ诱导树突状细胞免疫激活致动脉粥样硬化斑块不稳定的研究[D];浙江大学;2010年
4 王正昕;肿瘤微环境中浸润性树突状细胞的表型和免疫学功能的研究及其临床意义[D];第二军医大学;2000年
5 周向阳;新型热休克蛋白HSP-DC激活树突状细胞及其佐剂效应研究[D];第二军医大学;2003年
6 赵鸿;未成熟树突状细胞联合骨髓移植诱导大鼠异体肾移植免疫耐受的研究[D];复旦大学;2003年
7 陈玉丙;树突状细胞抗原负载及MAGE-3 DNA瘤苗研制[D];吉林大学;2004年
8 王宏伟;肺间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的免疫激活与免疫耐受作用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
9 赵毅;青藤碱对RA患者树突状细胞免疫功能的影响及机制研究[D];第一军医大学;2007年
10 刘海波;Fas信号激活树突状细胞炎性复合体形成的生物学意义与分子机制研究[D];第二军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴鸣宇;黑色素瘤基因(MAGE-1)相关肽负载树突状细胞对肝癌细胞杀伤作用的实验研究[D];苏州大学;2003年
2 孟冬梅;急性髓细胞白血病细胞来源的树突状细胞的诱导及功能研究[D];青岛大学;2003年
3 梁军利;IFN-β1a对多发性硬化树突状细胞分泌的细胞因子影响的研究[D];广西医科大学;2010年
4 黄祺琦;耐受性树突状细胞来源的exosome治疗小鼠免疫介导性再生障碍性贫血的实验研究[D];南昌大学;2010年
5 初晓霞;淋巴瘤树突状细胞的表达与临床分期、恶性度及预后的相关性研究[D];青岛大学;2002年
6 刘丽燕;MyD88在OK-432诱导树突状细胞成熟中的作用[D];福建医科大学;2010年
7 郭佳;TLR配体诱导骨髓来源树突状细胞获得产生全反式维甲酸的能力[D];浙江大学;2011年
8 才志刚;冻融抗原冲击致敏的树突状细胞诱导产生肺癌特异性免疫应答的实验研究[D];第二军医大学;2004年
9 李静;癌—睾丸抗原OY-TES-1致敏树突状细胞的体外抗肝癌研究[D];广西医科大学;2011年
10 吴军;树突状细胞(DC)的培养及CEA-重组痘苗病毒转染DC诱导的特异性T细胞免疫[D];第一军医大学;2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王雪飞;[N];健康报;2004年
2 章静波;[N];健康报;2009年
3 记者 白毅;[N];中国医药报;2009年
4 方彤;[N];健康报;2006年
5 本报记者 沈湫莎;[N];文汇报;2011年
6 张献怀;[N];中国医药报;2004年
7 记者 毛黎;[N];科技日报;2006年
8 杨淑娟;[N];中国医药报;2006年
9 ;[N];中国医药报;2006年
10 章米力;[N];健康报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978


{bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育app}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bckbet}|
{uc8}| {uc8体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐城}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {UC体育}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}|