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刺五加叶中黄酮类化合物的提取、分离及抗氧化活性研究

【摘要】:刺五加是一味传统中药,属五加科植物,具有抗疲劳、抗炎、抗菌、抗肿瘤、治阳痿等功效,含有黄酮、皂苷、多糖、微量元素和氨基酸等化学成分。本文以刺五加叶中的黄酮类化合物为研究对象,进行提取、分离和抗氧化活性研究。 ⑴将传统的浸提、回流提取方法和现代的超声、ASE快速溶剂提取方法进行了对比分析,研究结果表明超声提取法为刺五加叶中黄酮类化合物的最佳提取方法。利用正交实验优化超声法提取刺五加叶中总黄酮的提取工艺,以50%乙醇溶液提取,提取时间为1.5 h,提取次数为2次,溶媒倍量为20倍为最佳提取条件,提取率为5.192%,加样回收率达到99.98%。 ⑵采用高速逆流色谱技术对刺五加叶中有效化学成分进行分离提取研究,选用乙酸乙酯:甲醇:水(1:0.15:1,V/V/V)为溶剂系统,检测波长为254 nm,从乙酸乙酯萃取层中分离得到了芦丁及其同分异构体,绿原酸,槲皮素,金丝桃苷及其同分异构体,其中绿原酸纯度为88.29%,槲皮素纯度为78.59%,芦丁及其同分异构体和金丝桃苷及其同分异构体分别被同时分出。 采用高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术对刺五加叶总黄酮粗提物进行分析,结合高效液相色谱图中各化合物的保留时间及其相对分子质量,与有关文献进行比较,确定了刺五加叶粗提物中含有芦丁及其同分异构体,金丝桃苷及其同分异构体,两种二咖啡酰奎宁酸类化合物,绿原酸,槲皮苷和槲皮素等9种化合物。 ⑶分别采用清除DPPH自由基和对羟基自由基两种方法对刺五加叶的总黄酮粗提物进行抗氧化活性研究评价。结果表明,刺五加叶总黄酮粗提物对DPPH有良好的清除作用,随其浓度的增加,随反应时间的延长,清除作用增强,30 min后趋于平稳,测定IC50为0.0865 mg/mL;对羟基自由基具有良好的清除作用,随着浓度的增加,清除作用增强,结果表明清除率与黄酮浓度之间存在着一定的量效关系。

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