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刺五加皂苷B对大鼠心肌缺血再灌注和过氧化氢损伤心肌细胞凋亡的影响及机制

【摘要】: 刺五加叶皂苷(Acanthopanax senticosus saponins, ASS)是从刺五加叶中分离得到的含有16种活性成分的总皂苷,其中刺五加皂苷B(Ciwujianoside B, C-B)是一种新发现的主要单体成分。本论文研究C-B对心肌细胞过氧化氢(H_2O_2)损伤和大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响,探讨C-B对H_2O_2和心肌缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡的作用及机制。主要研究内容如下: 1.原代培养乳鼠心肌细胞,利用不同浓度的H_2O_2引起心肌细胞损伤,结果显示: C-B可增加H_2O_2 50、100μmol·L~(-1)损伤后的心肌细胞存活率,提高抗氧化能力,减轻氧化损伤。 2.原代培养乳鼠心肌细胞,通过H_2O_2 200μmol·L~(-1)诱导心肌细胞凋亡,采用流式细胞术及蛋白免疫印迹等方法,证实:C-B可减轻氧化损伤,降低Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达及活性,调节Bcl-2和Bax蛋白表达,阻止线粒体膜电位降低,抑制线粒体释放Cyt c、Smac和AIF,通过调控线粒体途径相关的凋亡蛋白表达抑制细胞凋亡。 3.通过结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min、再灌注4 h建立心肌缺血再灌注损伤模型,结果表明:C-B可改善大鼠心脏功能及心肌组织病理改变,增加GSH含量及GSH-Px、SOD活性,降低MDA含量及MPO活性,通过抗氧化机理对心肌缺血再灌注损伤起保护作用。 4.通过大鼠在体心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡,采用TUNEL原位标记细胞凋亡检测法、免疫组化、蛋白免疫印迹及实时荧光定量PCR等方法,结果表明:C-B可提高Bcl-2/Bax比值,抑制线粒体释放Cyt c、Smac和AIF,减少心肌组织Caspase-3、Caspase-9蛋白表达和活性,减弱PARP降解,抑制心肌细胞凋亡,其保护心肌的作用可能与P38MAPK、JNK及PI3K/AKT信号转导通路的激活有关。 综上所述,C-B对乳鼠心肌细胞过氧化氢损伤及大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,可抑制其所诱导的心肌细胞凋亡。

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