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疏肝利胆法对免疫性肝纤维化大鼠细胞外基质代谢与免疫调控机制的研究

【摘要】: 目的:研究疏肝利胆法对肝纤维化大鼠细胞外基质代谢与免疫的调控作用,探讨其防治肝纤维化的作用机制,揭示肝纤维化的主要病理机制为肝胆郁滞。 方法:以猪血清腹腔注射法复制大鼠免疫损伤性肝纤维化模型,通过光镜形态学,放免法测定血清透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PcⅢ)和层粘连蛋白(LN),转化生长因子β_1+WJIu_1)结蛋白(desmin)和Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)的免疫组化,CollagenⅢ和基质金属蛋白酶1(MMP-1)的mRNA的原位杂交等指标的观察探讨该方对细胞外基质的影响;通过检测外周血T细胞亚群CD_4~+、CD_8~+和CD_4~+/CD_8~+比值变化和ELISA法定量检测大鼠脾淋巴细胞产生IL-2和IFN-γ探讨该方对肝纤维化大鼠的淋巴细胞免疫调节作用。 结果:模型组肝脏内有明显的纤维组织增生,间隔增宽,假小叶形成;中药各剂量组肝脏结构基本正常,未见纤维组织增生,小叶周围有一些空泡状坏死,无假小叶形成;中药高、中、低剂量组和空白对照组HA水平均显着低于模型组和秋水仙碱组,而秋水仙碱组又显着低于模型组;中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组和空白对照组LN水平均显着低于模型组;中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组和空白对照组PCⅢ水平均显着低于模型组,中药高剂量组显着低于秋水仙碱组;中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组和空白对照组CD_4~+阳性细胞数均显着高于模型组,中药高、中、低剂量组和空白对照组CD_4~+阳性细胞数均显着高于秋水仙碱组;中药高、中、低剂量组和空白对照组CD_8~+阳性细胞数均显着高于秋水仙碱组和模型组,秋水仙碱组和模型组差异不显着;中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组和空白对照组CD_4~+/CD_8~+的比值均显着高于模型组,中药高、中、低剂量组和空白对照组均显着高于秋水仙碱组;中药高、中、低剂量组和空白对照组脾细胞产生IL-2水平均显着高于秋水仙碱组和模型组,秋水仙碱组和模型组差异不显着;中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组和空白对照组脾细胞产生IFN-γ水平均显着高于模型组,中药高、中、低剂量组和空白对照组均显着高于秋水仙碱组;转化生长因子β_1(TGFβ_1的免疫组化显示模型组表达增强,中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组表达较弱;结蛋白(desmin)的免疫组化显示模型组desmin阳性细胞明显增多,中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组desmin阳性细胞较少;Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)的免疫组化显示模型组表达增强,中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组表达较弱;CollagenⅢmRNA的原位杂交mRNA的原位杂交显示模型组表达增强,中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组表达较弱;基质金属蛋白酶(MMP-1)的mRNA的原位杂交显示模型组表达明显减弱,中药高、中、低剂量组、秋水仙碱组表达有不同程度的增强或减弱较小。 结论:免疫性肝纤维化以肝胆郁滞为主要病机,疏肝利胆法有良好的抗肝纤维化的作用且优于秋水仙碱,其作用机制可能是:①对T-淋巴细胞的免疫调控作用,主要通过调控CD_4~+、CD_8~+亚群功能而发挥对肝纤维化大鼠的淋巴细胞免疫功能调节作用,促进脾脏淋巴细胞产生IL-2和IFN-γ,进而对贮脂细胞的增殖活化、细胞外基质的生成和降解进行调控而发挥抗肝纤维化的作用。在免疫调节中免疫细胞CD_4~+亚群和细胞因子IL-2发挥了主导作用。②保护肝细胞,防止其变性、坏死和异常增生的作用;③抑制贮脂细胞的活化、TGFβ_1和CollagenⅢ的蛋白表达;④抑制CollagenⅢmRNA的表达;⑤增强MMP-1mRNA的表达;⑥对免疫性肝纤维化的细胞外基质代谢与免疫的网络调控作用。

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