收藏本站

葛根芩连汤联合PD-1抑制剂通过重塑免疫微环境治疗结肠癌的机制研究

【摘要】:结肠癌(Colon cancer)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。随着我国经济和社会的发展以及生活方式的改变,这种疾病在我国的发病率呈快速上升趋势,成为了严重危害人类健康的“杀手”。结肠癌的常规治疗手段包括手术、化疗、放疗以及靶向治疗,但总体疗效并不令人满意。近年来,免疫检查点抑制剂(如PD-1、PD-L1抗体)的问世为许多恶性肿瘤的治疗带来了新的希望。但遗憾的是,PD-1抑制剂治疗结肠癌的效果是十分有限的。因此,为了解决这一难题,已有许多研究将PD-1抑制剂与其他抗肿瘤治疗(例如化学治疗,靶向治疗,放疗或其他免疫治疗等)联合应用,并取得了一定成效。中医药作为我国的瑰宝,在疾病的治疗中起着重要的作用。中药联合化疗、放疗等手段在肿瘤的治疗中亦取得了较好的治疗效果。中西医联合治疗结肠癌等恶性肿瘤已经得到了广泛认可。但目前对于中药联合PD-1抑制剂治疗结肠癌的研究尚无报道。本研究通过观察葛根芩连汤(Gegen Qinlian Decoction,GQD)联合PD-1抑制剂对治疗结肠癌皮下移植瘤模型有无疗效;随后采用流式细胞术、免疫组织化学、免疫荧光等方法研究联合治疗对肿瘤免疫微环境的影响;最后利用16S rDNA高通量测序及代谢组学技术进一步探讨GQD联合PD-1抑制剂抗肿瘤可能作用的机制,从而为GQD联合PD-1抑制剂治疗结肠癌提供理论依据。第一部分基于网络药理学分析葛根芩连汤对结直肠癌患者免疫状态的影响目的:基于中药网络药理学,寻找GQD对结肠癌治疗的可能作用机制,并探讨GQD对结直肠癌患者外周血T细胞亚群变化的影响。方法:1.基于药理学数据库对GQD活性化合物筛选,构建候选化合物-靶点网络,与结肠癌相关基因数据库(OMIM,GAD和TTD)进行比对、分析和去重,寻找与结肠癌作用的相关靶点蛋白。并且对筛选出的化合物靶点蛋白和结肠癌靶点蛋白进行蛋白互作分析(Protein and protein interac-tion,PPI)。最后对PPI中核心靶点蛋白进行GO和KEGG富集分析,寻找GQD可能在结肠癌中发挥作用的关键通路。2.选取河北医科大学第四医院自2018年7月1日到2019年1月1日组织学确诊为结直肠癌的患者20例。采用流式细胞术,检测GQD用药前后结直肠癌患者外周血CD8+T细胞和CD4+T细胞的比例。结果:1.从GQD中共获得了126种候选化合物,260个潜在候选靶点蛋白,150个结肠癌相关靶点蛋白,79个潜在的核心靶点蛋白。并且发现这些核心靶点蛋白可能参与肿瘤的发生发展,以及T细胞和B细胞相关信号通路。2.结直肠癌患者应用GQD后与用药前相比外周血淋巴细胞中CD4+T细胞的比例明显升高,差异有统计学意义(P0.05),而CD8+T细胞的比例无明显变化。小结:GQD在结肠癌中作用的靶点蛋白主要参与了肿瘤发生发展以及T细胞、B细胞等免疫相关信号通路;GQD可能改善结直肠癌患者的全身免疫状态。第二部分葛根芩连汤联合PD-1抑制剂治疗结肠癌的疗效观察及其对免疫微环境的影响目的:,探讨GQD联合PD-1抑制剂对结肠癌荷瘤小鼠肿瘤生长的影响,以及联合治疗对荷瘤小鼠免疫状态和肿瘤免疫微环境的影响。方法:1.构建结肠癌细胞系(CT26)诱导的皮下移植瘤模型。共设8组,分别为A组:低剂量GQD(L-GQD:300mg/kg/d)+PD-1抑制剂组;B组:中剂量GQD(M-GQD:1500mg/kg/d)+PD-1抑制剂组;C组:高剂量GQD(H-GQD:7500mg/kg/d)+PD-1抑制剂组;D组:L-GQD组;E组:M-GQD组;F组:H-GQD组;G组:PD-1抑制剂组;H组:对照组。随后我们评估了各组肿瘤体积及肿瘤生长抑制率(tumour growth inhibition rate,TGI),并收集实验动物的肿瘤样本、外周血以及粪便。2.运用流式细胞术,检测实验分组中的A组、D组、G组以及H组荷瘤小鼠外周血CD8+T细胞和CD4+T细胞的比例。3.采用免疫组织化学及免疫荧光技术,检测A组、D组、G组以及H组荷瘤小鼠肿瘤组织内CD8+T细胞的表达差异。4.采用酶联免疫吸附技术测定以上4组小鼠肿瘤组织内IFN-、IL-2、IL-6、IL-17,TGF-β以及PD-1的表达量。结果:1.灌胃32d小鼠,A、B、C三组肿瘤体积均小于H组(P0.01),且A组vs.H组差异最明显;A组肿瘤体积小于G组,有统计学差异(P0.05);G组肿瘤体积小于H组,有统计学差异(P0.01);D、E、F单用中药各组肿瘤体积与H组相比无明显差异;A、B、C三组间以及D、E、F三组间比较肿瘤体积无明显差异。2.A组、D组、G组小鼠外周血淋巴细胞中CD8+T细胞的比例均高于H组,差异有统计学意义(P0.05),且A组vs.H组的差异最明显(P0.01)。但以上三组与H组相比,CD4+T细胞比例均无统计学差异。3.免疫组化结果显示:A组小鼠肿瘤组织中CD8+T细胞的表达明显高于H组,差异有统计学意义(P0.05)。D组、G组与H组相比,小鼠肿瘤组织中CD8+T细胞比例均无统计学差异。4.A组小鼠肿瘤组织中CD8+T细胞的荧光强度明显高于其他各组。5.ELISA结果显示:A组小鼠肿瘤组织内IFN-和IL-2的表达均明显高于H组,差异有统计学意义(P0.05)。A组PD-1的表达明显低于H组,差异有统计学意义(P0.01)。而IL-17,IL-6,TGF-β的表达在各组间无统计学差异。小结:GQD联合PD-1抑制剂可增强对荷瘤小鼠的抗肿瘤疗效;GQD联合PD-1抑制剂还可改善荷瘤小鼠外周血免疫状态,并重塑肿瘤免疫微环境。第三部分葛根芩连汤联合PD-1抑制剂对结肠癌肠道菌群的影响及代谢组学分析目的:基于荷瘤小鼠粪便16S rDNA测序和外周血代谢组学分析,筛选联合治疗后的差异菌群以及代谢产物,探讨GQD联合PD-1抑制剂通过重塑免疫微环境治疗结肠癌的机制。方法:1.分别对PD-1抑制剂治疗前的两个组:应用GQD组(GQD组:A组+D组);未应用GQD组(Non-GQD组:G组+H组)以及治疗后4个组(A组、D组、G组和H组)荷瘤小鼠的粪便进行16S rDNA测序,进行OTU分析、PCA分析,物种多样性分析以及组间物种差异分析,并筛选在门、属、种水平上的差异菌群。2.收集4组(A组、D组、G组和H组)荷瘤小鼠PD-1抑制剂治疗后的血清样本,进行超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS)分析,筛选差异代谢物,并于与数据库进行比对,从而获得差异代谢物及可能参与的信号通路。结果:1.PD-1抑制剂治疗前小鼠粪便16S rDNA测序分析本实验共得到2629590个有效序列(序列平均长度252.6091528),664258502个有效碱基,263个OTU(Operational Taxonomic Units)。在属水平得到9个显著差异物种,在种水平得到14个显著差异物种,其中s_unclassified_f_Erysipelotrichaceae在GQD组中明显富集,而s_uncultured_organism_g_norank_f_Peptococcacea和s_uncultured_g_norank_f_Bacteroidales_S24_7_group在Non-GQD组中明显富集。2.PD-1抑制剂治疗后小鼠粪便16S rDNA测序分析本实验共得到了2692871个有效序列(序列的平均长度为252.5071873),679969282个有效碱基,318个OTU。D组vs.H组在属水平得到17个显著差异物种,在种水平得到29显著性差异物种;G组vs.H组,在属水平得到7个显著性差异物种,在种水平得到17个显著性差异物种;A组vs.H组,在属水平得到13个显著性差异物种,在种水平得到26个显著性差异物种,其中s_Bacteroides_acidifaciens和s_uncultured_organism_g_norank_f_Bacteroidales_S24-7_group在A组显著富集,而s_uncultured_bacterium_g_norank_f_Bacteroidales_S24-7_group和s_uncultured_Bacteroidales_bacterium_g_norank_f_Bacteroidales_S24-7_group在H组显著富集。A组vs.G组,在属水平得到10个显著性差异物种,在种水平得到12个显著性差异物种,其中s_Bacteroides_acidifaciens在A组显著富集,cteroidales_bacterium_g_norank_f_Bacteroidales_S24-7_group在G组显著富集。3.L-GQD联合PD-1抑制剂对小鼠血清代谢组学的影响在本实验共检出负离子模式化合物2554个,正离子模式化合物3504个。D组vs.H组获得391个差异代谢物;G组vs.H组获得308个差异代谢物;A组vs.H组获得322个差异代谢物,且A组vs.H组特有的差异化合物有158个,主要富集通路为甘油磷脂代谢和鞘脂类代谢。对差异代谢物进行分级聚类,A组中丰度较高的代谢物,主要包括Lyso PC(20:3(5Z,8Z,11Z)),vignatic acid B,Lyso PE(0:0/22:4(7Z,10Z,13Z,16Z)),Lyso PE(0:0/20:2(11Z,14Z))和PI(20:4(8Z,11Z,14Z,17Z)/16:0);A组中丰度较低的代谢物,主要包括(1a S,5R,6R,9a R)-6-[2,6-dideoxy-2-(methylamino)],isopeonidin 3-rutinoside,glycerol 2-(9Z,12Zoctadecadienoate),tetraethylene glycol和pentadecanoylglycine。小结:GQD联合PD-1抑制剂可能通过改善肠道菌群,以及某些特定代谢产物,增强对结肠癌的治疗疗效。结论:1.GQD在结肠癌中作用的靶点蛋白主要参与了肿瘤发生发展以及T细胞、B细胞等免疫相关信号通路;GQD可能改善结直肠癌患者的全身免疫状态。2.GQD联合PD-1抑制剂可增强对荷瘤小鼠的抗肿瘤疗效;GQD联合PD-1抑制剂还可改善荷瘤小鼠外周血免疫状态,重塑肿瘤免疫微环境。3.GQD联合PD-1抑制剂可能通过改善肠道菌群,以及某些特定代谢产物,增强对结肠癌的治疗疗效。

下载App查看全文

(如何获取全文? 欢迎:、、)

支持CAJ、PDF文件格式


【相似文献】
中国期刊全文数据库 前18条
1 赵书娅;付朝红;杨长永;姜慧萍;彭月香;申青;;《PD-1抑制剂治疗:黑色素瘤护理计划小组关于管理不良事件的共识声明》解读[J];护理研究;2020年13期
2 吕欣阳;任秀宝;;PD-1抑制剂癌症治疗中的肝脏毒性[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2020年06期
3 吕达娜;庞素秋;;PD-1抑制剂致免疫相关不良反应的分析及药学监护[J];医药导报;2020年12期
4 龙浪;罗锋;王力;鄢国清;;PD-1抑制剂治疗复发难治性胸腺瘤1例报道及文献复习[J];现代肿瘤医学;2020年17期
5 王林娟;张庆;;非小细胞肺癌100例PD-1抑制剂治疗后的护理分析[J];实用临床护理学电子杂志;2020年11期
6 王叶涛;李克桑;;PD-1免疫检查点抑制剂在口腔鳞状细胞癌治疗中的研究进展[J];肿瘤药学;2020年02期
7 郭凯;朱斌;汪丰;;PD-1抑制剂致肌炎伴重症肌无力1例分析[J];上海医药;2020年03期
8 陈蓉;周丹;曹玉敏;;PD-1抑制剂在癌症免疫治疗中应用探讨[J];临床医药文献电子杂志;2018年43期
9 谈仪炯;林洁;许蒙;刘珏;;PD-1抑制剂导致神经系统不良反应的报道及相关分析[J];中南药学;2020年06期
10 胡雷;张瑞;毛露;Dirk Hermann;陈艾东;;PD-1抑制剂作为治疗非霍奇金淋巴瘤新靶点的疗效展望[J];医学理论与实践;2020年02期
11 李洪瑜;;PD-1抑制剂免疫治疗颅内恶性肿瘤的护理体会[J];实用临床护理学电子杂志;2020年02期
12 孙红雨;张玲侠;葛丹;汪晓兰;;免疫检查点抑制剂抗PD-1抗体治疗肝细胞肝癌的临床护理观察[J];心理月刊;2020年08期
13 钱磊;冯继锋;;PD-1信号通路在非小细胞肺癌中的研究进展[J];中国肿瘤外科杂志;2020年02期
14 冯伟;许玉炫;覃文进;刘理礼;张贺龙;;PD-1抑制剂心脏毒性研究进展[J];现代肿瘤医学;2020年09期
15 董利菊;张玉;肖兰;杨媛媛;沙泉;;新生儿脐带血调节性T细胞比率及T细胞上PD-1表达的初步研究[J];免疫学杂志;2020年02期
16 茅芯慧;;PD-1抗体联合放射治疗头颈部肿瘤进展[J];临床医药文献电子杂志;2020年08期
17 刘巍;李婧婧;丁娅;李丹丹;文习之;祝保艳;张晓实;;PD-1抗体联合替莫唑胺治疗晚期黑色素瘤的疗效及安全性分析[J];中山大学学报(医学科学版);2020年03期
18 段厚全;叶小英;葛彦;居颂光;;PD-1在类风湿关节炎外周血T淋巴细胞亚群表达的临床意义[J];国际检验医学杂志;2020年11期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 吴燕华;曹东慧;曲丽梅;曹雪源;贾志芳;赵天成;王权;姜晶;;PD-1及PD-L1/L2蛋白的协同表达对胃癌预后的影响分析[A];2017年中国肿瘤标志物学术大会暨第十一届肿瘤标志物青年科学家论坛论文汇编[C];2017年
2 周小斌;周成林;;PD-1信号通路与自身免疫病[A];第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2016年
3 高月求;李曼;孙学华;朱晓俊;周振华;;慢性乙型肝炎病毒感染自然过程中PD-1的表达情况及其机制[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
4 张彦红;林向阳;胡丽萍;谢耀盛;陆红;张卓;胡王强;张纯武;孙莉;;外周血淋巴细胞PD-1低表达与强直性脊柱炎疾病的关系[A];2012年浙江省检验医学学术年会论文集[C];2012年
5 胡振华;陈永井;王勤;白利雄;周莹;於葛华;张学光;;一株鼠抗人PD-1功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
6 段继惠;刘晔华;穆红;唐志琴;史瑞;;原发性胆汁性肝硬化患者协同刺激分子PD-1的检测及临床意义[A];中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2012年
7 杨梦园;袁瑛;;PD-1抑制剂在晚期肝癌治疗中的研究进展[A];浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会论文汇编[C];2018年
8 郭理杏;李萡;方苏;史丽;陈少华;杨力建;李扬秋;;再生障碍性贫血患者外周血单个核细胞PD-1和PDL-1表达特点[A];第九届全国免疫学学术大会论文集[C];2014年
9 徐本玲;高全立;袁龙;张勇;汪小姣;;结直肠癌患者外周血及肿瘤组织中Tim-3~+PD-1~+的表达与临床分期相关[A];第十四届全国肿瘤生物治疗大会论文集[C];2015年
10 陈永井;王勤;周迎会;王雪峰;谢芳;於葛华;张学光;;PD-1/PD-L1在T细胞上的共表达及其生物学意义[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
11 张国梁;万和荷;刘丽丽;侯勇;刘永华;杨小军;李艳;;慢性乙型肝炎肝组织中PD-1表达与肝脏病理分级及中医证型的研究[A];第二十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2014年
12 华圣元;陈洁;;银屑病与PD-1的相关性研究进展[A];2017全国中西医结合皮肤性病学术年会论文汇编[C];2017年
13 那妍;李智伟;;HBeAg阳性慢性乙肝患者替比夫定治疗前后外周血T细胞表面PD-1表达的变化及临床意义研究[A];中华医学会第十六次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2013年
14 王小红;张桂梅;冯作化;;可溶性PD-1促进HSP70-肽复合物抗肿瘤效应的研究[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年
15 吴溢鑫;崔轩;胡智奕;钟波;田琦;肖楚琼;吕正兵;;基于鲨鱼免疫系统的PD-1抗原单域抗体的初步研究[A];中国生物化学与分子生物学会2019年全国学术会议暨学会成立四十周年论文集[C];2019年
16 闵月;徐琴英;宋晓翔;陈永井;李晓忠;;过敏性紫癜患儿外周血单个核细胞上PD-1信号的表达及临床意义[A];中华医学会第十五次全国儿科学术大会论文汇编(上册)[C];2010年
17 范慧敏;吴令杰;杨湛;胡凤玉;;原发性肝癌患者PD-1基因拷贝数及其转录和蛋白表达水平的研究[A];第二十次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2011年
18 石刚;杨茜媚;张郁菁;邓洪新;;联合CSF-1R抑制剂和溶瘤病毒协同增强PD-1抗体治疗效果的机制研究[A];第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2018年
19 王九平;张野;聂青和;李军;南雪平;王临旭;魏欣;;慢性丙型肝炎患者外周血PD-1分子的检测及免疫学意义[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年
20 龚福生;郑秋红;;应用CRISPR/Cas9技术靶向敲除人T细胞PD-1基因及对T细胞功能的影响[A];第十二届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2017年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 吕骥;葛根芩连汤联合PD-1抑制剂通过重塑免疫微环境治疗结肠癌的机制研究[D];河北医科大学;2020年
2 徐新建;肠道菌群通过代谢途径影响PD-1抑制剂治疗结直肠癌疗效的研究[D];河北医科大学;2020年
3 ;[D];;年
4 张勇;PD-1抑制剂治疗前后肿瘤免疫微环境中部分免疫细胞、免疫检查点变化的研究[D];中国人民解放军医学院;2018年
5 赵咫龙;PD-1删除后T细胞抗肿瘤作用的实验研究[D];河北医科大学;2018年
6 唐鸿;负性协调刺激分子PD-1通路对原发性难治性癫痫免疫调控的研究[D];重庆医科大学;2017年
7 姚安会;PD-1对巨噬/小胶质细胞极化的作用机制及其在脊髓损伤修复中的作用研究[D];第四军医大学;2013年
8 刘晓燕;乙型肝炎病毒感染慢加急性肝衰竭患者PD-1的表达研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
9 金波;PD-1与急性乙型肝炎进展相关性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
10 李卿;miRNA调节PD-1+耗竭性T细胞的作用机制研究[D];南昌大学;2016年
11 王飞;PD-1对脓毒症小鼠肝脏枯否细胞功能的影响与机制研究[D];第二军医大学;2013年
12 ;[D];;年
13 明志君;鼠抗人PD-1单克隆抗体的研制及其生物学功能研究[D];苏州大学;2006年
14 李树锋;Tim-3和PD-1在类风湿性关节炎中的表达和作用研究[D];山东大学;2014年
15 杜慧敏;LAG3与PD-1在乳腺癌患者T细胞中的共表达特点及作用研究[D];重庆医科大学;2020年
16 宋洋;病理组织和外周血中PD-L1和PD-1表达对侵袭性非霍奇金淋巴瘤患者预后影响的实验研究[D];北京协和医学院;2016年
17 左孟轩;PD-1在T细胞非霍金淋巴瘤外周血淋巴细胞中的研究[D];北京协和医学院;2017年
18 吴佳竹;慢性淋巴细胞白血病中CD8~+T细胞的PD-1基因表达及其甲基化调控研究[D];南京医科大学;2016年
19 张浩;PD-1介导的免疫抑制在老年髋部骨折术后感染易感性中的作用及初步机制探索[D];第三军医大学;2015年
20 仇昊;PD-1和CTLA-4基因多态性及其表达水平与疾病易感性及免疫功能的相关性研究[D];东南大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 朱辰壮;冷冻消融联合PD-1抑制剂在小鼠肾肿瘤模型中的疗效评估和机制探索[D];上海交通大学;2019年
2 吴佳茗;PD-1在结直肠癌发生发展中的表达分析及临床意义[D];苏州大学;2016年
3 林芳玉;小剂量化疗对胃癌移植瘤免疫微环境的影响及其联合PD-1单抗的抗肿瘤效应的研究[D];福建医科大学;2019年
4 陈如月;可溶性PD-1和PD-L1在儿童原发性肾病综合征中的临床意义[D];苏州大学;2018年
5 杨相雄;PD-1在上尿路结石合并肾癌中的表达及意义[D];湖南师范大学;2019年
6 高万丰;升麻素苷通过靶向MDSCs增强PD-1抑制剂抗肿瘤效果的研究[D];南开大学;2019年
7 周伟华;IL-6、PD-1和PD-L1在下咽癌中表达及其临床意义[D];川北医学院;2019年
8 何义;PD-1在大鼠肺缺血再灌注损伤中的作用[D];广西医科大学;2019年
9 陈诗雪;计算机辅助设计抗EGFR、VEGF、PD-1、CTLA-4多特异性抗体研究[D];中国人民解放军医学院;2018年
10 陈群;抗生素对抗PD-1抗体治疗实体瘤疗效的影响[D];福建医科大学;2018年
11 陆臻桢;可溶性PD-1融合肿瘤抗原MUC1和Survivin的DNA疫苗抗肿瘤研究[D];吉林大学;2016年
12 乌丽盼·波拉提;新疆地区汉族、哈萨克族PD-1基因多态性与心房颤动的相关性研究[D];新疆医科大学;2018年
13 沙合木·阿那尔拜;新疆地区汉族,哈萨克族心房颤动患者外周血PD-1表达特点及PD1.5位点多态性的研究[D];新疆医科大学;2018年
14 严晓菊;多频谱免疫组化检测PD-1、PD-L1、CEACAM-1和TIM-3在下咽癌中表达及临床意义[D];川北医学院;2018年
15 叶倩;PD-1和IDO在乳腺癌肿瘤微环境和引流淋巴结中的表达情况研究[D];重庆医科大学;2018年
16 周岐;TIM-3、PD-1在乳腺浸润性导管癌患者中的表达及意义[D];江苏大学;2018年
17 易凡;PD-1和PD-L1在胃癌患者中的表达及其临床意义的研究[D];兰州大学;2018年
18 范利华;抗PD-1纳米抗体的筛选鉴定及功能分析[D];新疆大学;2018年
19 姚彪;急性ST段抬高型心肌梗死患者血清PD-1表达水平及临床意义[D];苏州大学;2017年
20 姜亚男;PD-1基因单核苷酸多态性与川崎病的研究[D];天津医科大学;2013年
中国重要报纸全文数据库 前20条
1 本报见习记者 刘禹;[N];上海科技报;2018年
2 本报记者 张晓东;[N];健康报;2018年
3 一诺;[N];医药经济报;2018年
4 辛桦;[N];企业家日报;2019年
5 本报记者 郑希均;[N];浙江日报;2018年
6 本报记者 胡睿;[N];医药经济报;2019年
7 高崇;[N];健康报;2019年
8 本报记者 沈海珠;[N];台州日报;2018年
9 本报记者 周璐璐;[N];中国证券报;2019年
10 本报记者 卢杉;[N];21世纪经济报道;2018年
11 记者 方彬楠 姚倩 常蕾;[N];北京商报;2018年
12 记者 张甜甜 金追峰;[N];苏州日报;2018年
13 本报记者 郑莹莹;[N];医药经济报;2019年
14 本报记者 马飞;[N];医药经济报;2019年
15 本报记者 张蓝飞;[N];医药经济报;2019年
16 本报记者 朱萍 实习生 刘金健;[N];21世纪经济报道;2019年
17 张蓝飞;[N];医药经济报;2019年
18 本报记者 阎俏如;[N];中国经营报;2019年
19 本报记者 张敏;[N];证券日报;2019年
20 本报记者 宋一宁;[N];医药经济报;2019年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978


{bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育app}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bckbet}|
{uc8}| {uc8体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐城}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {UC体育}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}|