收藏本站

ZEB2在食管癌侵袭转移中的作用及其机制研究

【摘要】:目的:E盒结合锌指蛋白2(E-box binding zinc finger protein 2,ZEB2)是一类具有手指状结构域的转录因子,对基因调控起重要作用。目前,在人类的多种恶性肿瘤中,如膀胱癌、胃癌、口腔鳞状细胞癌中均有ZEB2表达增高,且其表达量的增加与肿瘤的恶性演进及不良预后密切相关。但对于ZEB2在食管鳞癌中表达及其相关机制研究未见报道,ZEB2抑制E-钙黏附蛋白(E-cadherin)的转录是通过与E-cadherin启动子区的E-box序列相结合,使得E-Cadherin表达降低,最终促使EMT的发生。同时TGF-β1也诱导EMT发生,本研究以食管癌组织及细胞株为研究对象,研究ZEB2在食管鳞癌(esophageal squamous carcinoma,ESCC)组织及人食管癌细胞株kyse140、TE1、Ca ES-17、Eca-109中的表达及意义,通过对ZEB2基因干扰和ZEB2过表达质粒构建,同时给予TGF-β1诱导来探讨ZEB2对上皮间质转化(EMT)和细胞极性(Cell polarity)的影响,进一步明确ZEB2对食管癌侵袭转移的影响。方法:1、采用免疫组织化学SP法检测ZEB2和E-cadherin在218例ESCC患者癌组织(ESCC组)及60例ESCC患者癌旁5cm的正常食管组织(对照组)中的表达情况,采用Kaplan-Meier进行生存分析,应用Cox回归模型分析影响预后相关因素。分析在食管癌中ZEB2和E-cadherin的表达与临床病理相关参数间的关系,采用RT-PCR法检和Western blot检测食管癌细胞株kyse140、TE1、Ca ES-17、Eca-109中ZEB2 m RNA、CRB3 m RNA和E-cadherin m RNA的表达以及与之对应蛋白的表达。2、筛选ZEB2干扰效率高的si RNA片段,然后将干扰效率高的实验细胞分为4组,即LV-NC-si RNA组、LV-ZEB2-si RNA组、TGF-β1+LV-NC-si RNA组、TGF-β1+LV-ZEB2-si RNA组。分别检测TGF-β1诱导下干扰ZEB2前后的人食管癌Ca ES-17细胞生物学行为的变化,经RT-PCR及Western blot法分别检测ZEB2基因干扰对E-cadherin m RNA、vimentin m RNA、CRB3 m RNA以及与之对应蛋白表达的影响,采用Transwell小室测定细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。3、构建ZEB2过表达质粒pc DNA3.1(+)/ZEB2,感染kyse140细胞,然后将实验细胞分为4组,分别为pc DNA3.1(+)组、TGF-β1+pc DNA3.1(+)组、pc DNA3.1(+)/ZEB2组、TGF-β1+pc DNA3.1(+)/ZEB2组。分别检测TGF-β1诱导下ZEB2过表达前后的人食管癌kyse140细胞生物学行为的变化,经RT-PCR及Western blot法分别检测ZEB2基因过表达对E-cadherin m RNA、vimentin m RNA、CRB3 m RNA以及对应蛋白表达的影响,分别采用Transwell小室和划痕实验测定细胞的侵袭和迁移能力,在体水平,采用裸鼠转移瘤模型观察ZEB2对肺转移能力的影响。4、根据裸鼠的体重进行随机分组并进行编号,每组6只,分成2组。在小鼠进行环境适应期间,将Kyse140细胞分为2组分别为pc DNA3.1(+)组、pc DNA3.1(+)/ZEB2组细胞的培养在尾静脉注射第12周时小鼠通过引颈法被处死后打开胸腔,摘取出肺组织,观察大体及病理情况。结果:1、ESCC组ZEB2表达率(35.3%)高于对照组(18.3%)(P0.05),ZEB2的表达与肿瘤浸润深度、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期有关(P0.05),而与患者的性别、年龄和分化程度无关(P0.05)。采用Kaplan-Meier生存分析结果显示,ZEB2阳性表达组和阴性表达组患者术后中位生存时间分别为17.20个月和37.97个月,两组间差异有统计学意义(P0.05)。ESCC组E-cadhedn阳性表达率(45.8%)明显低于癌旁组织(66.7%),两组间差异有统计学意义(P0.05);其表达与年龄、性别和肿瘤大小、肿瘤分化程度、没润深度和TNM分期无关(P0.05),而仅与淋巴结转移(P0.05)密切相关。采用Kaplan-Meier生存分析显示,E-cadherin阳性表达组和阴性表达组患者术后中位生存时间分别为24个月和34个月,但两组间差异无统计学意义(P0.05)。ZEB2阳性表达同时E-cadherin阴性表达组中位生存时间为15个月,低于ZEB2阴性表达同时E-cadherin阳性表达组为43.47个月,差异有统计学意义(P=0.002)。2、ESCC组ZEB2与E-cadherin表达呈负相关性(r=-0.469,P0.01);癌旁组织中ZEB2与E-cadherin表达呈负相关性(r=-0.689,P0.01);采用Cox比例风险模型分析显示ZEB2阳性表达可作为ESCC预后的独立因素。3、食管癌Ca ES-17细胞中ZEB2 m RNA相对表达量最高,kyse140细胞中ZEB2m NRA相对表达量最低,而食管癌kyse140细胞中Ecadherin m NRA相对表达量最高,Ca ES-17细胞中Ecadherin m RNA相对表达量最低,且在食管鳞癌细胞中ZEB2与E-cadherin表达呈负相关。4、干扰ZEB2后荧光定量PCR检测各组细胞CRB3及E-cadherin表达水平,结果显示LV-ZEB2-si RNA组与LV-NC-si RNA组的细胞相比,ZEB2 m RNA的表达明显减少;而LV-ZEB2-si RNA组的kyse140细胞,TGF-β1(+)和TGF-β1(-)的E-cadherin m RNA和CRB3 m RNA的表达减少均被逆转;但TGF-β1(-)组逆转更明显,差异有统计学意义,(P0.05)。而Vimentin m RNA的表达增加被逆转,差异有统计学意义,(P0.05)。WB检测相关蛋白表达,在TGF-β1(+)中,干扰ZEB2后CRB3蛋白及E-Cadherin蛋白表达量增加,而Vimentin蛋白表达量降低,且差异有统计学意义(P0.05)。在TGF-β1(-)中同样发现干扰ZEB2后CRB3蛋白及E-Cadherin蛋白表达量增加,而Vimentin蛋白表达量降低,且差异有统计学意义(P0.05),但TGF-β1(+)与TGF-β1(-)比较中发现TGF-β1(+)组中CRB3蛋白及E-Cadherin蛋白表达量增加较TGF-β1(-)组增加明显,且差异有统计学意义(P0.05),而TGF-β1(+)组较TGF-β1(-)组Vimentin蛋白表达量降低明显,差异有统计学意义(P0.05)。5、干扰ZEB2后侵袭试验结果显示,LV-NC-si RNA组(Ca ES-17)穿膜细胞数为194.7±15.8,LV-ZEB2-si RNA组穿膜细胞数为92.0±7.2,后者的细胞数明显减少,差异有统计学意义(P0.05);TGF-β1+LV-NC-si RNA组(Ca ES-17)穿膜细胞数为252.7±8.0,TGF-β1+LV-ZEB2-si RNA组穿膜细胞数为152.0±4.0,后者的细胞数明显减少,差异有统计学意义(P0.05);TGF-β1(+)与TGF-β1(-)穿膜细胞数增加,差异有统计学意义(P0.05)。下调ZEB2后细胞划痕法实验结果显示:24小时和48小时后检测发现,LV-NC-si RNA组与LV-ZEB2-si RNA组相比,细胞愈合速度明显降低差异有统计学意义(P0.05);TGF-β1+LV-ZEB2-si RNA组细胞与LV-ZEB2-si RNA组相比,细胞愈合速度明显降低,差异具有统计学意义,(P0.05)。6、过表达ZEB2后荧光定量PCR检测各组细胞CRB3 m RNA、E-Cadherin m RNA和Vimentin m RNA表达水平,结果显示无论是否TGF-β1诱导,ZEB2过表达后CRB3m RNA及E-Cadherin m RNA表达量降低,而Vimentin m RNA表达量增加,差异有统计学意义(P0.05),但TGF-β1诱导组较无TGF-β1诱导组E-Cadherin m RNA及CRB3 m RNA表达降低明显,而Vimentin m RNA表达量增加更明显,差异有统计学意义(P0.05),WB检测过表达ZEB2后无论是否TGF-β1诱导,ZEB2过表达后CRB3及E-Cadherin表达量降低,而Vimentin蛋白表达量增加,但TGF-β1(+)与TGF-β1(-)CRB3、E-Cadherin蛋白表达降低明显,差异有统计学意义(P0.05),而Vimentin蛋白表达量增加更明显(P0.05)。7、过表达ZEB2后侵袭试验结果显示,pc DNA3.1(+)组(kyse140)穿膜细胞数为94.4±5.7,pc DNA3.1(+)/ZEB2组穿膜细胞数为219.0±7.2,后者的细胞数减少,差异有统计学意义(P0.05);TGF-β1+pc DNA3.1(+)组穿膜细胞数为162±7.0,TGF-β1+pc DNA3.1(+)/ZEB2组穿膜细胞数为252.0±6.0,后者的细胞数减少,差异有统计学意义(P0.05);TGF-β1(+)组与TGF-β1(-)组穿膜细胞数增加,差异有统计学意义(P0.05)。过表达ZEB2后细胞划痕法实验结果显示:24小时和48小时后检测发现,pc DNA3.1(+)组与pc DNA3.1(+)/ZEB2组相比,细胞愈合速度明显降低(P0.05);pc DNA3.1(+)/ZEB2组与TGF-β1+pc DNA3.1(+)/ZEB2组相比,细胞愈合速度明显降低(P0.05)。8、在体水平,裸鼠肺大体标本和病理切片观察提示pc DNA3.1(+)/ZEB2细胞组肺转移瘤成瘤率为4/5,而pc DNA3.1(+)细胞组大体及显微镜下均未见肺转移灶,二者间差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.食管鳞癌组织中存在ZEB2的高表达和E-cadherin的低表达,二者呈负相关,且ZEB2是影响食管鳞癌预后的独立因素。2.在食管癌组织中ZEB2的高表达与肿瘤浸润深度、肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移及预后相关,E-cadhedn在食管癌组织中的表达与淋巴结转移相关,两者异常表达可能在食管癌恶性进展及侵袭转移中有重要意义。3.在食管癌细胞株中ZEB2呈高表达,而E-cadherin呈低表达,且二者呈负性相关,ZEB2可能通过抑制E-cadherin的表达来促使EMT发生。4.在食管癌Ca ES-17和kyse140细胞中TGF-β1可以诱导EMT的发生。5.干扰ZEB2可使TGF-β1刺激导致的E-cadherin和上皮极性蛋白CRB3表达减少被逆转;而间皮标志物Vimentin的表达增加被逆转。可以抑制食管鳞癌Ca ES-17细胞的侵袭、迁移运动能力,可能在肿瘤细胞侵袭和转移过程中发挥重要作用。6.过表达ZEB2可使TGF-β1刺激导致的E-cadherin、上皮极性蛋白CRB3表达下降更明显,而间皮标志物Vimentin的表达却增加。可以促进食管鳞癌kyse140细胞的侵袭、迁移运动能力,可能在恶性肿瘤细胞侵袭和转移过程中发挥重要作用。7.ZEB2可能通过调节上皮极性蛋白CRB3来改变细胞极性,促进肿瘤的侵袭和转移。

下载App查看全文

(如何获取全文? 欢迎:、、)

支持CAJ、PDF文件格式


【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 傅晨薇 ,郎景和;SERUM SOLUBLE E-CADHERIN LEVEL IN PATIENTS WITH ENDOMETRIOSIS[J];Chinese Medical Sciences Journal;2002年02期
2 夏红强;E-cadherin在肿瘤组织的检测及意义[J];临床肿瘤学杂志;2003年06期
3 ;Expression of TGF-β1,Snail,E-cadherin and N-cadherin in Gastric Cancer and Its Significance[J];Chinese Journal of Clinical Oncology;2007年06期
4 熊小蔚;崔明;;T-cadherin与肿瘤[J];医学综述;2010年08期
5 ;E-Cadherin在膀胱乳头状移行细胞癌的表达[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);1996年02期
6 张文军,张志谦,林仲翔,王耐勤,胡颖;Correlation between expression of cadherin and gap junctional communication in human lung carcinoma cells[J];Science in China(Series C:Life Sciences);1998年04期
7 ;The expression of N-cadherin/catenins/actin complex in human lung normal and carcinoma cells[J];Chinese Science Bulletin;1998年09期
8 ;Quantitative analysis of E-cadherin expression and clinicopathologic evaluation in gastric cancer[J];Chinese Medical Journal;1998年01期
9 Ge-Liang Liu;Han-Jie Yang;Tian Liu;Yun-Zhao Lin;;Expression and significance of E-cadherin,N-cadherin,transforming growth factor-β1 and Twist in prostate cancer[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2014年01期
10 王曦,吴人亮,郝天玲,陈芳;Effects of Cigarette Smoke Extract on E-cadherin Expression in Cultured Airway Epithelial Cells[J];Journal of Tongji Medical University;2000年01期
11 陈晓峰,丁嘉安,高文,易祥华,王海峰,李化;E-cadherin表达与非小细胞肺癌淋巴结转移及预后的相关性研究[J];中国肺癌杂志;2002年04期
12 阮秋蓉,胡余昌;Immunophenotypings of Malignant Epithelial Mesothelioma and Their Roles in the Differential Diagnosis[J];华中科技大学学报(医学英德文版);2004年02期
13 ;The expression of core fucosylated E-cadherin in cancer cells and lung cancer patients: prognostic implications[J];Cell Research;2004年05期
14 ;Expression of E-cadherin in gastric carcinoma and its correlation with lymph node micrometastasis[J];World Journal of Gastroenterology;2005年20期
15 ;Differential regulation of cadherin expression by osteotropic hormones and growth factors in vitro in human osteoprogenitor cells[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年06期
16 车向明;王曙逢;樊林;张如愿;赵伟;;E-cadherin反义寡核苷酸对肿瘤细胞浸润能力影响的研究[J];中国普外基础与临床杂志;2006年02期
17 张永兴;徐洪涛;齐凤杰;王恩华;;连接蛋白43在肺癌组织中表达及对E-cadherin的影响[J];中华病理学杂志;2006年06期
18 Annie On On Chan;;E-cadherin in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2006年02期
19 ;Conversion of cadherin isoforms in cultured human gastriccarcinoma cells[J];World Journal of Gastroenterology;2006年06期
20 王红兵;苗慧;蔡晓敏;吴秀英;胡西旦;迪力努;陈春玲;;肺癌组织E-cadherin表达的免疫组织化学研究[J];徐州医学院学报;2007年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;Core Fucosylation Regulates E-cadherin Binding Affinity in Human Lung Cancer Cells[A];2008年全国生物化学与分子生物学学术大会论文摘要[C];2008年
2 ;Epigenetic regulation of E-cadherin in HBV associate human Hepatocellular carcinoma[A];江苏省遗传学会第八届会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2010年
3 王冰晶;张志谦;;癌细胞cadherin亚型转变及其分子机制[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
4 ;Suppressed survival and proliferation of ovarian cancer cells by repressed MEK-ERK activation via knocking-down of E-cadherin[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
5 ;N-cadherin:a potential receptor of GDNF[A];Proceedings of the 8th Biennial Conference of the Chinese Society for Neuroscience[C];2009年
6 Zhiyang Xu;Dechang Li;Baohua Ji;;Quantification of the stiffness and strength of cadherin ectodomain binding with different ions[A];北京力学会第20届学术年会论文集[C];2014年
7 贾文亮;张庆瑜;;关于E-cadherin在胃癌和肺癌中表达情况的研究[A];天津市生物医学工程学会第三十三届学术年会论文集[C];2013年
8 乌新春;倪志超;段昕所;宋有鑫;;绿色荧光蛋白标记的T-cadherin基因稳定转染黑素瘤细胞株的建立[A];第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编[C];2009年
9 ;Manipulation of N-cadherin level and function through different methods results in distinct functional changes in hippocampal neurons[A];Proceedings of the 7th Biennial Meeting and the 5th Congress of the Chinese Society for Neuroscience[C];2007年
10 张宪真;陈随芹;耿秀东;;N-Cadherin与E-Cadherin在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究[A];中国肿瘤内科进展 中国肿瘤医师教育(2014)[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 霍小东;ZEB2在食管癌侵袭转移中的作用及其机制研究[D];天津医科大学;2017年
2 杨颖涛;白细胞介素10基因多态性与食管癌的关系及其机制研究[D];郑州大学;2017年
3 杨哲;分子标志物在食管癌同期放化疗中的指导价值研究[D];山东大学;2017年
4 王湛;E-cadherin、β-catenin、MMP16在食管癌中的表达及与化疗疗效的关系及对食管癌细胞化疗敏感性的影响[D];郑州大学;2017年
5 王晓敏;食管癌容积旋转调强放疗计划剂量学临床相关研究[D];郑州大学;2017年
6 杨俊俊;Rab5 GTPase介导的VE-cadherin内吞调控肺微血管内皮细胞屏障功能的机制[D];第三军医大学;2015年
7 张红燕;STAT3/ZEB1/E-cadherin信号轴在食管鳞癌上皮间质转化中的作用及机制研究[D];郑州大学;2016年
8 陶祥;SNAI2—E-cadherin轴在LRIG1调节人脑胶质瘤细胞侵袭和转移中的作用研究[D];武汉大学;2016年
9 王唯一;双氢青蒿素对喉癌干细胞侵袭和转移的影响及其相关机制研究[D];河北医科大学;2017年
10 宋小珍;Par3-aPKC与Vangl2相互作用并参与调节E-cadherin-based粘附连接和管腔化形成[D];北京协和医学院;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 衷灿梅;12-脂氧合酶通过上皮间质转化促进胃癌侵袭转移的机制研究[D];福建医科大学;2015年
2 高玉梅;探索N-cadherin在卵巢癌发生和进展中的作用及意义[D];石河子大学;2015年
3 林路;E-cadherin,β-catenin,N-cadherin在浆液性卵巢癌中的表达及意义[D];安徽医科大学;2015年
4 辛明;Galectin-3通过EGFR介导调控肿瘤细胞E-cadherin表达的机制研究[D];山东大学;2015年
5 孟梅;VE-cadherin对血管稳态的作用及调控机制[D];苏州大学;2015年
6 汪威;丙泊酚对荷瘤大鼠MADB106肿瘤细胞肺转移及E-cadherin和β-catenin的影响[D];南方医科大学;2015年
7 孙琳;ALCAM、E-cadherin和β-catenin在甲状腺乳头状癌中的表达及意义[D];河北医科大学;2014年
8 于海峰;FOXQ1和E-cadherin在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义[D];天津医科大学;2015年
9 何宏月;EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail和Slug在子宫内膜异位症中的表达及意义[D];天津医科大学;2015年
10 刘超;EMX2和E-cadherin在食管鳞癌中的表达及临床病理意义[D];天津医科大学;2015年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978


{bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育app}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育}| {bcksports}| {bck官网}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育}| {bckbet}| {bcksports}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bck体育}| {bckbet}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bcksports}| {bck官网}| {bck}| {bck体育官网}| {bcksports}| {bck体育下载}| {bck体育app}| {bckbet}|
{uc8}| {uc8体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐城}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8老虎机}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {uc8彩票}| {uc8}| {uc体育}| {UC体育}| {UC8娱乐城}| {uc8}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {uc8}| {uc体育}| {uc8体育}| {UC体育}| {uc8官网}| {uc8老虎机}| {UC8娱乐}| {UC8娱乐城}|